Genômica funcional de Apis mellifera: busca de novos genes e redes funcionais no contexto do desenvolvimento, da diferenciação de castas e da reprodução

Resumo

Com uma contribuição ativa (5021 ORESTES, depositados no GenBank) e a participação na anotação do recentemente seqüenciado genoma de Apis mellifera, o nosso grupo conta com conhecimento consolidado e experiência necessária para análises da expressão gênica em larga escala nestas abelhas. Seguindo as questões as quais já investigamos desde a era pré-genômica, tais como mecanismos da determinação de castas e do sexo e as bases fisiológicas da reprodução e da divisão de trabalho, propomos neste projeto uma análise em larga escala da expressão gênica em diferentes fases do ciclo de vida das abelhas. Concentraremos-nos nas seguintes questões: a identificação de genes envolvidos no desenvolvimento das castas, na morte celular programada nos ovários de larvas, na diferenciação do tegumento, na ativação dos ovários em rainhas e operárias, no ciclo funcional das glândulas hipofaríngeas e na determinação do sexo nas fases iniciais da embriogênese. Além disto, varreremos as nossas bibliotecas em busca de possíveis candidatos a micro-RNAs para elucidar a participação deste novo grupo de reguladores pós-transcricionais nos contextos mencionados acima. O projeto adotará duas estratégias, sendo a) a identificação de genes candidatos no genoma da abelha a partir do conhecimento prévio da função destes genes em outros organismos, especialmente os atributos do Gene Ontology registrados no Flybase, e b) a busca e análise de novos genes através de microarrays, por estratégias de hibridização subtrativa e pela construção de uma biblioteca de cDNA das fases embrionárias. A expressão diferencial destes genes será avaliada e candidatos de interesse serão investigados com mais detalhe por RT-PCR quantitativa e silenciamento por RNAi. O conjunto das informações geradas será submetido a análises de redes gênicas para revelar possíveis conexões e a organização em redes funcionais. (AU)