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Valor preditivo de ploidia de dna combinada a marcardores de transformação maligna em lesles orais cancerizáveis

Processo:17/06579-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de setembro de 2017 - 31 de agosto de 2019
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia
Pesquisador responsável:Marcelo Sperandio
Beneficiário:
Instituição-sede: Sociedade Regional de Ensino e Saúde Ltda. Faculdade São Leopoldo Mandic (SLMANDIC). Centro de Pesquisas Odontológicas São Leopoldo Mandic
Pesq. associados:

Andresa Borges Soares ; Vera Cavalcanti de Araujo

Assunto(s):Transformação celular neoplásicaAneuploidiaAutofagiaCiclo celularCitometria de fluxoMetabolismo celular
Resumo

O carcinoma espinocelular oral (CEO) está entre os tipos mais comuns de câncer no mundo, com aproximadamente 600.000 novos casos por ano acompanhados de 120.000 mortes e sobrevida de 5 anos de aproximadamente 50%. O diagnóstico e tratamento precoces são os fatores de maior impacto na sobrevida e qualidade de vida destes pacientes. A maioria dos CEO é precedida por alterações assintomáticas, detectadas em mucosa oral, chamadas de lesões potencialmente malignas (DPM). Não existe uma característica clínica ou microscópica patognomônica capaz de prever transformação maligna. Sugere-se, na proposta deste trabalho, que marcadores diversos de processos biológicos relacionados à tumorigênese, tais como aneuploidia, alterações do ciclo celular, autofagia, bem como alterações metabólicas possam ter maior valor prognóstico do que marcadores isolados ou aqueles associados a um único processo biológico. Assim, os objetivos deste trabalho serão: 1) Fazer um levantamento de lesões cancerizáveis da boca de acordo com seu grau de displasia epitelial e identificar os casos que sofreram transformação maligna; 2) Avaliar a ploidia de DNA das lesões identificadas e sua correlação com a expressão de proteínas envolvidas no processo de tumorigênese, tais como ciclina D1, Glut-1, galectina 3, LC3B e Beclin-1; 3) Calcular os valores preditivos de transformação maligna, sensibilidade e especificidade de cada um dos marcadores bem como de combinações de marcadores. Serão utilizados os casos do arquivo de biópsias preservadas em parafina da São Leopoldo Mandic. As lâminas de cada caso serão revistas quanto ao diagnóstico do grau de displasia epitelial e divididas em 6 grupos (N=240, n=40): leucoplasias sem displasia, leucoplasias com displasia leve, leucoplasias com displasia moderada, leucoplasias com displasia severa, carcinoma in situ (controle positivo) e hiperplasias fibrosas inflamatórias (controle negativo). A determinação da ploidia de DNA será realizada através de suspensões de núcleos epiteliais obtidos por digestão enzimática, corados com iodeto de propídio e analisados por citometria de fluxo. Os biomarcadores ciclina D1, Glut-1, galectina 3, LC3B e Beclin-1 serão investigados por imunohistoquímica. Os dados da ploidia e dos demais biomarcadores serão analisados descritivamente e estatisticamente pelo teste de sobrevivência de Kaplan-Meier tanto para cada marcador individual como para combinações de marcadores. Espera-se com os resultados obtidos desenhar uma matriz diagnóstica e prognóstica destas lesões capaz de prever transformação maligna de lesões da mucosa oral com alta sensibilidade e especificidade. (AU)

Resumo

A compreensão dos mecanismos da gênese da obesidade, bem como a capacidade de reversão do fenótipo obeso, é de extrema importância para a prevenção e combate desta patologia e suas comorbidades. O hipotálamo, localizado no sistema nervoso central, coordena a homeostase energética, através da atuação de duas populações neuronais com funções antagônicas. O consumo de dietas ricas em gorduras saturadas promove inflamação hipotalâmica e prejudica a sinalização anorexigênica, que possui como efetores funcionais os clivados do peptídeo POMC. Sabe-se que a disfunção dos neurônios anorexigênicos (neurônios que expressam POMC) ocorre devido a instalação do processo inflamatório e em dois níveis distintos: numérico (morte celular) e funcional. Os peptídeos clivados de POMC, além de seu papel na homeostase energética, apresentam conhecidos papéis anti-inflamatórios. Nenhum trabalho até então explorou o impacto da disfunção de tais peptídeos na inflamação hipotalâmica. Nossa hipótese é que a disfunção de neurônios POMC é um dos eventos necessários para a perpetuação e intensificação do sinal inflamatório no hipotálamo, uma vez que haverá diminuição dos níveis teciduais de ±-MSH, um dos peptídeos clivados a partir de POMC. Nossos objetivos são explorar a capacidade anti-inflamatória do ±-MSH na linhagem celular de micróglia e in vivo em um contexto obesogênico. Serão avaliados a capacidade de indução da expressão de citocinas, bem como a reprogramação metabólica das células imunes. Esperamos que o tratamento in vitro com o análogo sintético de ±-MSH seja capaz de induzir um perfil anti-inflamatório na micróglia, e que essa alteração seja acompanhada de uma mudança de seu metabolismo celular. Acreditamos ainda, que em um contexto obesogênico (tratamento com palmitato), o tratamento com o análogo sintético será capaz de reverter, ou pelo menos atuar, o tônus inflamatório. Esperamos que, in vivo, possamos estabelecer correlações entre os níveis teciduais de ±-MSH e o perfil inflamatório no hipotálamo. (AU)

Resumo

O tratamento atual da doença de Pompe, pertencente a classe dos distúrbios de depósito lisossômico, é realizado por terapia de reposição enzimática utilizando a glicoproteína recombinante humana alfa-Glicosidase ácida, produzida em células de ovário de hamster chinês (CHO). Apesar dos resultados satisfatórios, casos de reações imunológicas graves têm sido reportados devido as diferenças entre a proteína recombinante e a nativa do organismo. Há um crescente entusiasmo em relação ao uso de linhagens celulares humanas como plataforma para produção de glicoproteínas recombinantes, por conta de sua capacidade de produzir glicoproteínas o mais próximo possível àquelas encontradas naturalmente no corpo humano, minimizando as possíveis reações imunogênicas. Frente ao exposto o presente trabalho tem como objetivo avaliar o potencial de produção da glicoproteína recombinante humana ±-Glicosidase ácida pela linhagem celular humana HKB-11. Para isto, as células HKB-11 serão geneticamente modificadas e cultivadas em meio livre de soro fetal bovino e em suspensão, condições compatíveis com a escala industrial. Após a modificação gênica será caracterizada a cinética de crescimento e o metabolismo celular bem como a cinética de produção da enzima. Espera-se com este trabalho, avaliar a possibilidade de estabelecimento de uma plataforma alternativa de produção desta enzima, capaz de gerar um produtor com menor imunogenicidade. (AU)

Resumo

A melatonina, hormônio responsável por carrear as informações fotoperiódicas ao organismo, transmite dados sobre as variações na intensidade de luz que ocorre durante os dias e noites ao longo do ano, permitindo ao organismo responder com mudanças adaptativas às alterações do meio ambiente. Regula ainda várias funções celulares, como modulação da imunidade tipo humorais e da medida por células, controle do metabolismo de glicose e insulina no tecido adiposo, atuação sobre a atividade neuronal no hipocampo, ação sobre o tônus vascular, regulação da função reprodutiva em mamíferos. Em humanos, pesquisadores mostraram que a melatonina está mais de três vezes aumentada no líquido folicular do que na circulação sanguínea, o que sugere a influência deste hormônio na maturação folicular. Além disso, as células da granulosa de ovários de ratas expressam os receptores de melatonina do tipo I e II e ação dependente dos níveis de estrogênio no meio de cultura, podendo ter uma ação estimulatória ou inibidora sobre o AMP cíclico, modulando o metabolismo intracelular. Contudo, pouco se sabe sobre sua ação sobre as células da granulosa em mulheres com infertilidade principalmente os mecanismos moleculares envolvidos. Por esta razão, estamos realizando este estudo para avaliar as vias de ação da melatonina sobre as células da granulosa dos ovários de mulheres com infertilidade por estudos de biologia molecular envolvendo diversas vias de sinalização como a angiogênese. (AU)

Resumo

O uso de nanopartículas compreende aplicações promissoras na medicina. Destacam-se as Nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) por serem produzidas com componentes biodegradáveis e biocompatíveis. Diversos estudos demonstram que essas nanopartículas são internalizadas pelas células, são processadas e muito tem-se estudado sobre seus efeitos terapêuticos, mas pouco se sabe sobre seus efeitos em vias de sinalização intracelular. O estudo da endocitose associado à sinalização se faz necessário para melhor entender os impactos dessas nanopartículas em células eucarióticas. Resultados prévios de nosso laboratório mostram uma correlação entre internalização de NLS e a translocação de Smad2/3 fosforilada para o núcleo de células de câncer de próstata (PC-3). A Smad2/3 fosforilada é relacionada com a ativação da via de sinalização do TGF-Beta. Essa via está relacionada com estágios avançados do câncer, aumentando a migração e invasão celular quando desregulada. A presente proposta pretende avaliar os efeitos da transfecção por NLS na via de sinalização do TGF-Beta, observando quais são as consequências para o metabolismo celular de células normais de próstata PNT2 e células de câncer de próstata PC-3 na possível ativação da via do TGF-Beta. (AU)

Resumo

A obesidade pode ser descrita como a "nova síndrome mundial", caracterizada por uma inflamação crônica de baixo grau que é devida principalmente à endotoxemia sistêmica, o que ocorre em consequência de um aumento da permeabilidade intestinal devido a alterações da microbiota intestinal e, consequentemente, extravasamento de endotoxinas, tais como lipopolissacarídeo (LPS) para a circulação. Além disso, na obesidade, são descritas diferenças entre o metabolismo das células imunes. Importantemente, na obesidade observa-se um aumento do infiltrado de macrófagos CX3CR1+ na lâmina própria intestinal. Células CX3CR1+ da lâmina própria representam um grupo heterogêneo de células, que expressam níveis altos, baixos e intermediários de CX3CR1 juntamente com F4/80 e CD11b. No ambiente intestinal, o metabolismo basal é diferente de outros tecidos. Os níveis basais de O2 são excepcionalmente baixos devido ao fluxo de sangue em contra-corrente, à presença de bactérias e de muco. Sabendo que os macrófagos residentes CX3CR1+ da lâmina própria estão sobrevivendo nesse microambiente hipóxico, diferentes necessidades de energia podem ser requeridas, comparados a macrófagos residentes de outros tecidos. Assim, a identificação de mecanismos que são moduladores do metabolismo desses macrófagos pode facilitar a compreensão dos processos inflamatórios no intestino durante a alimentação com uma dieta rica com lipídeos (HFD), e consequente desenvolvimento da obesidade. A obesidade está correlacionada com alterações na microbiota intestinal, secreção aumentada de metabólitos microbianos e absorção de nutrientes, aumento da permeabilidade intestinal, e níveis elevados de LPS circulantes. A função dos macrófagos está intimamente ligada a mudanças intrínsecas no metabolismo celular. Macrófagos da lâmina própria estão na interface entre a fisiologia intestinal e biologia sistêmica, e a nossa hipótese é de que, sob HFD, alterações no metabolismo dos macrófagos CX3CR1+ da lamina propria leva a perda de integridade da barreira intestinal, e, portanto, a indução da inflamação sistêmica que é crítica para o desenvolvimento da obesidade, inflamação crônica relacionada e resistência à insulina. (AU)

Resumo

O estudo da lógica da expressão gênica em bactérias luz da Biologia Sintética é muito dependente do uso de linhagens bacterianas mutantes para fatores de transcrição específicos de forma a facilitar a caracterização de cada componente do circuito isoladamente. Além disso, a análise de atividade promotora feita in vivo é normalmente feita através de genes repórteres fluorescentes (como o GFP) inseridos em plasmídeos. Entretanto, esses sistemas podem causar variações celulares, seja por diferença de número de plasmídeos por célula ou por sobrecarga do metabolismo celular, que podem influenciar na análise da expressão gênica. Nós já caracterizamos a ausência de efeitos pleiotrópicos na expressão gênica de GFP regulada por Promotores Constitutivos Sintéticos inserida por plasmídeos de baixo número de cópias em bactérias mutantes para Fatores de Transcrição Globais (CRP, IHF e Fis). Nesse projeto, prpõe-se a implementação de um sistema repórter mono cópia estável para integração no cromossomo a fim de se caracterizar a atividade promotora em Escherichia coli. Será testado também novos promotores sintéticos regulados por CRP e Fis de uma biblioteca de promotores em mono cópia usando a integração cromossomal. Esses sistemas de inserção serão feitos usando-se Transposons Vectors, amplamente descritos pelo Environmental Microbiology Laboratory, onde esse projeto será desenvolvido. O sistema desenvolvido no projeto proporcionará uma nova metodologia que será implementada posteriormente em Ribeirão Preto com um importante impacto em projetos do grupo. (AU)

Resumo

O NAADP (ácido nicotínico adenina dinucleótido fosfato) foi proposto como um segundo mensageiro para o glutamato em células neuronais e gliais através da ativação dos canais lisossômicos de Ca2+, TPC1 e TPC2. Entretanto, as ações do glutamato mediadas pelo NAADP permanecem obscuras. Neste estudo, avaliamos o efeito do glutamato na autofagia em astrócitos em concentrações fisiológicas não tóxicas. Descobrimos que o glutamato induz a autofagia semelhante àquela induzida pelo NAADP. No entanto, a inibição dos receptores TPC1 ou TPC2, pelo antagonista desses receptores, NED-19 ou pelo SiRNA, diminui a autofagia induzida por glutamato, confirmando um papel para a NAADP nesta via. O envolvimento de TPC1/2 na autofagia induzida por glutamato também foi confirmado em células de neuroblastoma SHSY5Y. Finalmente, mostramos que o glutamato ativa a autofagia dependente de NAADP via AMPK, enquanto a atividade de mTOR não é afetada por este tratamento. Em resumo, os nossos resultados indicam que o glutamato estimula a autofagia através do eixo NAADP/TPC/AMPK, proporcionando novos conhecimentos de como a sinalização de Ca2+ mediada pelo glutamato pode controlar o metabolismo celular no sistema nervoso central. (AU)

Resumo

Sepse é uma síndrome complexa induzida por microrganismos na qual o hospedeiro sofre com disfunções fisiológicas, imunológicas e bioquímicas, levando-o a um quadro grave e de alta taxa de mortalidade (30% a 60%) (CHAARI et al., 2016; DELLINGER et al., 2013; SINGER et al., 2016). A patofisiologia da sepse é caracterizada pela presença de microrganismos ou seus subprodutos na corrente sanguínea e pela liberação massiva de mediadores inflamatórios pelas células imunes. A combinação desses dois fatores ativa os neutrófilos presentes na circulação que ficam presos nos órgãos vitais do hospedeiro, onde liberam, entre outros mediadores citotóxicos, as Neutrophil Extracellular Traps (NETs). A literatura demonstra que as NETs contribuem para a falência de órgãos na sepse. NETs também estão envolvidas na lesão observada em várias outras doenças como diabetes e artrite (BRINKMANN et al., 2004; NAUSEEF; BORREGAARD, 2014). No contexto de sepse, as NETs estão envolvidas no dano tecidual em vários órgãos incluindo pulmões, rins e fígado (CZAIKOSKI et al., 2016). Apesar dos mecanismos envolvendo a produção de NETs não serem bem descritos durante episódios de sepse, há evidencias de que um evento inicial neste processo é a ativação da enzima dependente de cálcio PADI4. Recentemente, o link entre mudanças do metabolismo celular e a ativação do sistema imune tem sido consolidada (CHANG et al., 2015; HO et al., 2015; RODRÍGUEZ-ESPINOSA et al., 2015), no entanto, o envolvimento do metabolismo celular e a geração de NETs não foi bem investigado. Um estudo preliminar do nosso grupo demonstrou que diminuindo a atividade da via glicolítica resultou na diminuição da formação de NETs. Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a importância do imunometabolismo para o desenvolvimento das NETs e a piora do quadro séptico. Além disso vamos investigar uma nova abordagem terapêutica para a prevenção da sepse grave mesclando o tratamento tradicional com antibióticos com a modulação do metabolismo celular. (AU)

Resumo

Atualmente é evidenciada a necessidade de se compreender como alterações metabólicas podem contribuir para a modulação da atividade de vias de sinalização, de fatores de transcrição, e para alterações epigenéticas que favoreçam a proliferação celular, podendo ter implicações para a prevenção e tratamento do câncer.Benzo[a]pireno (B[a]P) é um carcinógeno difundido no meio ambiente, sendo utilizado em nossos estudos como indutor de transformação maligna em células epiteliais bronquiais humanas imortalizadas (BEAS-2B). No modelo de tumorigênese caracterizado no grupo observou-se que: i) as células expostas a B[a]P sofreram alterações no metabolismo intermediário logo na primeira hora de exposição, com queda inicial dos níveis de NAD+, NADH, NADPH, ATP, ADP, piruvato, lactato, succinato, malato, glutamina e glutamato, seguida pelo aumento significativo dos níveis dessas moléculas e de fumarato ao longo de 7 dias de incubação, em relação ao controle; ii) as alterações metabólicas observadas foram acompanhadas de alterações dos níveis de 5-mdC e 5-hmdC no DNA das células e aumento do crescimento de colônias em soft-agar, sem aumento da taxa de mutação no gene HPRT.Uma vez que NAD+ e NADH regulam a atividade de enzimas do metabolismo intermediário, de fatores de transcrição e a expressão de genes que codificam para proteínas envolvidas no controle do metabolismo e crescimento celular, e que fumarato e succinato são apontados como oncometabólitos, pretende-se aqui avaliar a modulação do metabolismo, de marcas epigenéticas, da expressão de alguns genes controlados pelo balanço redox NAD+/NADH, da expressão de proteínas envolvidas na alteração do metabolismo em células tumorais, e da transformação celular em células BEAS-2B suplementadas com NAD+, succinato e fumarato, na presença e ausência de B[a]P.Os dados obtidos permitirão uma melhor compreensão do papel de alterações metabólicas induzidas por xenobióticos (no caso, B[a]P) para a tumorigênese, sendo importante para a adoção de procedimentos efetivos de quimioprevenção do câncer, o que é necessário para que se diminuam os impactos sociais e econômicos desse grave conjunto de doenças que tende a crescer exponencialmente com o envelhecimento da população. (AU)

Resumo

Nos últimos 20 anos vêm ocorrendo um declínio na fertilidade das vacas leiteiras cuja etiologia é complexa. Inúmeros fatores têm sido identificados como os causadores da redução na fertilidade, entre eles distúrbios metabólicos como o balanço energético negativo (NEB). Vacas em NEB possuem as concentrações séricas dos corpos cetônicos aumentadas, cujo principal deles é o Ácido b-hidroxibutírico (BOHB), o qual aumenta em paralelo no fluido folicular e pode afetar a maturação oocitária e, consequentemente, o desenvolvimento embrionário. Entretanto, os mecanismos através dos quais os corpos cetônicos afetam a reprodução dos animais não são completamente entendidos a nível molecular. Recentemente, o BOHB foi descoberto ser um poderoso inibidor endógeno das Histonas Desacetilases (HDACs). As HDACs são enzimas que removem o radical acetil das histonas, desta forma exercem amplas funções regulatórias nas células, principalmente regulando a expressão gênica. Desta maneira, a inibição das HDACs causada pela exposição ao BOHB altera o epigenoma celular através da hiperacetilação das histonas. Uma vez que os níveis de BOHB oscilam em decorrência da alimentação do animal, esta molécula tem o potencial de agir como um elo conectando a nutrição do animal ao metabolismo celular e a regulação da expressão gênica. Entretanto, os mecanismos através dos quais a nutrição do animal pode afetar o seu epigenoma e consequentemente a reprodução são elusivos. Baseado nisso, este trabalho visa investigar como a exposição dos complexos cumulus-oócito (COCs) ao corpo cetônico BOHB durante a maturação oocitária in vitro altera o epigenoma e a população de RNAs destes, e se essas alterações afetam a maturação oocitária e o desenvolvimento embrionário in vitro. Nós esperamos com este projeto entender os mecanismos moleculares através dos quais um corpo cetônico comumente alterado em vacas leiteiras, o BOHB, pode afetar a fertilidade destes animais. (AU)

Resumo

Existem diversos tipos de tratamentos clareadores hoje em dia, associando ou não com luzes LEDs ou Laser, porém estas técnicas têm sido associado com queixas de sensibilidade pelo paciente. Com intuito de melhorar este desconforto pesquisadores tem proposto um clareamento denteário apenas a irradiação de uma fonte de luz LED violeta, sem a necessidade do gel clareador, porém restam dúvidas quanto sua eficácia e demais qualidades. Portanto será o objetivo deste trabalho avaliar este novo tratamento associado com diferentes concentrações de H2O2 quanto a sua eficácia clareadora, capacidade de penetração do H2O2 pela estrutura dentária, a citotoxicidade dos diversos protocolos, bem como a permeabilidade do esmalte e da dentina, e também avaliar a temperatura intrapulpar e a influência dos tratamentos na adesão à materiais resinosos. Para tanto inicialmente serão escolhidos 500 dentes bovinos. Em seguida estes dentes serão distribuídos para os testes a serem realizados. Depois de distribuídos, resultarão em 10 dentes para os seguintes grupos: GI-controle; GII-PH 35%; GIII-PH 17,5%; GIV-LED/Laser; GV-PH 35%+LED/Laser; GVI-PH17,5%+LED/Laser; GVII-LED violeta; GVIII-PH 35%+LED violeta; GIX-PH 17,5%+LED violeta. Os tratamentos clareadores serão realizados em 3 sessões, com 3 aplicações de 15 minutos em cada sessão, totalizando 45 minutos de contato do gel com o dente por sessão. Os grupos que receberem a irradiação com LED/Laser será feita 3 irradiações com 3 minutos cada, os grupos que receberem a irradiação com LED violeta, os espécimes serão irradiados por 20 vezes de 30s com intervalo de 1 minuto entre cada irradiação. Após os procedimentos clareadores, serão realizadas as análises de alteração cromática superficial e profunda, da intensidade de fluorescência, condutância hidráulica, capacidade de penetração do H2O2 através das estruturas dentárias, citotoxicidade, avaliando o metabolismo celular pelo teste de MTT, quantificar a variação da temperatura intrapulpar e também o teste de microtração para avaliar a capacidade de formação de tags após os tratamentos. Após a coleta dos dados, estes serão submetidos à testes estatísticos adequados para cada tipo de análise. (AU)

Resumo

Sepse é a principal causa de óbito em UTI e pode ser definida como uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção, o que causa disfunção orgânica. Dados recentes apontam que respostas tanto pró-inflamatórias como anti-inflamatórias ocorrem simultaneamente e desde o início do quadro séptico. E diversos estudos mostram a importância do metabolismo energético na regulação da resposta imune, que atua inclusive de forma a orientar a função e o destino celular. Diferentes células das respostas inata e adaptativa, por exemplo, quando ativadas trocam a fosforilação oxidativa pela glicólise aeróbia, fenômeno conhecido como efeito Warburg e regulado por HIF (fator de transcrição induzido por hipóxia). Dados já obtidos pelo nosso grupo apontam para alterações no metabolismo celular e mostram mudanças na expressão de proteínas de vias metabólicas no plasma de pacientes sépticos. Assim, o objetivo desse projeto é analisar como a função mitocondrial e o metabolismo celular estão alterados em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de pacientes sépticos. Será efetuada análise proteômica nas amostras de PBMC indivíduos sépticos e sadios, com foco em proteínas relacionadas ao metabolismo celular; e a validação será feita por western blotting. Para verificar se há transição do metabolismo para glicólise aeróbia serão dosados lactato e NAD+ nessas células, e também será feita análise da expressão de genes relacionados a HIF por PCR array. Esse estudo contribuirá na compreensão dos eventos celulares que regulam a imunomodulação na sepse, auxiliando na busca por terapias efetivas e novos métodos diagnósticos. (AU)

Resumo

O desenvolvimento de novos dispositivos para monitorar o metabolismo celular e o diagnóstico de doenças expandiu as pesquisas com biossensores, que aliados a nanotecnologia possibilitam a criação de novos elementos com alta sensibilidade de detecção, especificidade e capacidade de multiplexação em dispositivos portáteis. Desta forma, o monitoramento de produtos secretados por células e monitorados por de biossensores trás uma ampla gama de inovação nas áreas biomédicas e de saúde, pois este produtos liberados por células transmitem uma ampla variedade de sinais químicos e biológicos que são fundamentais para o diagnóstico clínico. Atualmente os estudos de biocompatibilidade e as respostas das células a estímulos físicos ou químicos podem ser avaliadas em dispositivos de microfluídicos e técnicas eletroquímicas. Aqui iremos desenvolver biossensores utilizando aptâmeros para estudar diferentes marcadores celulares liberados por células de câncer de próstata. Sendo assim, o objetivo desta proposta é desenvolver uma plataforma de um biossensor integrado para monitorar a detecção de multi-analitos (PSA, fPSA, hK2, Mucinas e fator de crescimento vascular endotelial,VEGF) em um dispositivo fabricado onde o microambiente celular pode ser definido com precisão, possibilitando a avaliação do metabolismo energético de culturas celulares no contexto da mimetização do microambiente celular e oferecendo novas perspectivas sobre os eventos moleculares do metabolismo. (AU)

Resumo

Tradicionalmente os mecanismos moleculares envolvidos no processo de tumorigênese são atribuídos à desregulação dos oncogenes e supressores de tumor que controlam vias de sinalização celular responsáveis pelo funcionamento do ciclo celular e manutenção do crescimento, proliferação e morte celular. No entanto, evidências recentes apontam para um mecanismo alternativo, em que a função primária da ativação de oncogenes e inativação de supressores de tumor é reprogramar o metabolismo celular. Esse cenário é consistente com as descobertas de que alguns metabólitos em si podem ter atividade oncogênica, alterando a sinalização e bloqueando a diferenciação celular. Estes sinais metabólicos agem desempenhando papéis críticos na determinação da estrutura da cromatina dado que são substratos necessários das enzimas modificadoras da cromatina que modificam tanto histonas quanto o DNA. Variações nestas duas vias irão determinar o remodelamento epigenético e o controle da expressão gênica. Neste projeto, vamos abordar como o metabolismo de glutamina em alfa-cetoglutarato, comandado em específico pela enzima glutaminase, afeta o remodelamento da cromatina e controle epigenético de vias importantes para a manutenção do fenótipo cancer stem cell (CSC). Embora não muito amplamente apreciado, sinais metabólicos e nutricionais (diretos ou via enzimas metabólicas) também desempenham um papel importante no controle genético da expressão pela alteração da função de fatores de transcrição. Neste projeto, vamos também abordar como uma descoberta feita pelo nosso grupo, de que a isoforma 3 do fator de transcrição induzido por hipóxia (Hypoxia-Inducible Factor, HIF) interage diretamente com lipídeos, afeta a atividade de regulação da transcrição deste fator; outro objetivo visa identificar os detalhes moleculares e funcionais da interação indentificada por nós entre a enzima glutaminase kidney-type, KGA, e o fator de transcrição PPAR³. (AU)

Resumo

A formação da dentina é um processo complexo que envolve diversos passos de diferenciação celular, culminando com o desenvolvimento de uma matriz mineralizada muito similar à do tecido ósseo. A regeneração dentinária pode ser necessária em casos de exposição pulpar, reabsorções e lesões cariosas. A engenharia tecidual tem estudado a regeneração funcional de tecidos perdidos baseada na presença de células, arcabouços e/ou substâncias que induzem a proliferação e diferenciação celular. Entre as diversas substâncias que podem interagir com o metabolismo celular estão os extratos ricos em proantocianidina, compostos fenólicos bioativos presentes no extrato da semente de uva (GSE). Sendo assim, o objetivo deste trabalho é avaliar o potencial estimulatório do GSE na atividade funcional de células indiferenciadas da polpa assim como de células odontoblastóides. Serão utilizadas células imortalizadas da papila dentária de camundongos (linhagens OD-21 e MDPC-23), que serão cultivadas em garrafas de cultura até a subconfluência. Em seguida, as células serão cultivadas em placas de 24 poços em uma concentração de 2 x 104 por poço e divididas em quatro grupos: células OD-21 sem adição do GSE (OD-21c), células OD-21 + 10 ¼g/mL de GSE (OD-21gse); células MDPC-23 sem adição do GSE (MDPC-23c); células MDPC-23 + 10¼g/mL de GSE (MDPC-23gse). Após 3, 7, 10 e 14 dias, serão analisados os seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, detecção in situ e atividade de fosfatase alcalina, quantidade de proteínas totais, além da detecção e quantificação de nódulos mineralizados. Os dados obtidos serão analisados por testes estatísticos e de normalidade, e o nível de significância será estabelecido em 5%. (AU)

Resumo

Durante a produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos o ambiente artificial provoca alterações no metabolismo celular causadas, entre outros fatores, pelo desequilíbrio entre a quantidade de espécies reativas de oxigênio (EROs) e de moléculas antioxidantes. Esta situação de desequilíbrio, denominada estresse oxidativo, é considerada uma das principais alterações observadas durante a PIVE e é uma das desencadeadoras do estresse do retículo endoplasmático. Para que ocorra o desenvolvimento, o embrião deve ser capaz de iniciar mecanismos de proteção contra o estresse. Alguns estudos relatam que o estresse oxidativo nos embriões é principalmente modulado pela via do NRF2. Diante disto, o presente projeto propõe-se a estudar os efeitos do tert-butilhidroquinona (tBHQ), um agonista da via do NRF2, durante a maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos, com o objetivo de avaliar o seu potencial como modulador do estresse oxidativo e do retículo endoplasmático nos oócitos maturados e embriões resultantes. Os resultados gerados por este trabalho contribuirão para o avanço do quadro atual da produção de embriões bovinos, além de abrir a perspectiva de uso deste agente para outras situações de cultivo in vitro de interesse. (AU)

Resumo

Este estudo tem por objetivo criar filmes de óxido de tântalo (Ta2O5) na superfície de titânio comercialmente puro (Ticp) por meio de pulverização catódica e avaliar seu comportamento eletroquímico, biocompatibilidade e formação de biofilme. Para isso, discos de Ticp serão divididos em dois grupos: superfície I - usinada (controle) e superfície II (experimental) - tratada com filme de Ta2O5. Para o ensaio eletroquímico, testes padrões como potencial de circuito aberto, espectroscopia de impedância eletroquímica e teste potenciodinâmico serão conduzidos em solução de fluido corpóreo (pH 7,4). A capacitância (Cdl) e resistência de polarização (Rp) da camada de óxido serão determinados por meio do circuito elétrico mais apropriado. O método de Tafel será utilizado para determinar a densidade de corrente de corrosão (Icorr) e o potencial de corrosão (Ecorr). A densidade de corrente de passivação (Ipass) corresponderá ao valor da corrente na transição entre a região ativa e passiva expressas na curva de polarização. A topografia dos discos será caracterizada através da microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia de energia dispersiva (EDS), microscopia de força atômica (MFA), espectroscopia de fotoelétrons de raios X (XPS), difratografia de raios-x (DRX), perfilometria e energia livre de superfície. Para os testes biológicos, será utilizada a linhagem celular pré-osteoblásticas MC3T3E1. A estrutura e morfologia celular serão avaliadas por MEV e microscopia de fluorescência. Reações de PCR em tempo real (qPCR) serão utilizadas para se determinar os níveis de expressão de genes osteogênicos. O ensaio de MTT será realizado para se avaliar a viabilidade/metabolismo celular, enquanto o ensaio de Alizarina vermelha será utilizado para identificar e quantificar o impacto das diferentes superfícies sobre a formação de depósitos minerais pelas células. A bioatividade das superfícies será testada pela imersão das amostras em fluido corpóreo. Para o teste microbiológico, biofilme composto por Streptococcus sanguinis será formado na superfície dos discos. Serão quantificadas as unidades formadoras de colônia (log UFC) e a análise estrutural do biofilme será realizada através da MEV. Os dados quantitativos serão submetidos à análise estatística mais apropriada com nível de significância de 5%. O número de espécimes para cada ensaio será determinado após o estudo piloto. (AU)

Resumo

A neurobiologia dos transtornos depressivos ainda não é completamente conhecida, mas é proposto que interações entre o sistema imunológico, estresse e sistema nervoso central (SNC) culminem em alterações neuroimunoendócrinas que facilitam o surgimento da depressão. Sabe-se que há aumento de citocinas pró-inflamatórias em indivíduos depressivos ou animais submetidos a estressores. Dentre esses mediadores, está a interleucina-1b (IL-1b), amplamente descrita como agente neuroinflamatório, antineurogênico e indutora de comportamentos tipo-depressivos em animais experimentais. A via de NFkB e o inflamassoma de NLRP3, complexo multiprotéico citosólico ativado em resposta a danos teciduais, alterações de metabolismo celular e infecções, medeiam a transcrição e função de IL-1b, induzindo a ativação do sistema imune inato e inflamação. A ativação do inflamassoma de NLRP3 tem sido amplamente descrita em modelos animais de estresse e pacientes depressivos possuem aumento de sua expressão em células mononucleares sanguíneas. A hiperativação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HHA) é observada tanto em humanos depressivos quanto em animais experimentais e já foi descrito que glicocorticoides sensibilizam a via do NLRP3. O canabidiol (CBD), composto não psicotomimético da Cannabis sativa, possui inúmeros efeitos terapêuticos já descritos - dentre os quais se destacam os tipo-antidepressivos e tipo-ansiolíticos em modelos animais, bem como atividade anti-inflamatória. Porém, a interação entre o CBD e o sistema imunológico no SNC, bem como seu possível envolvimento sobre os efeitos comportamentais da droga, ainda são pouco conhecidos. Desse modo, o presente projeto objetiva avaliar se o CBD é capaz de prevenir comportamentos pró-depressivos e relacionados à ansiedade, bem como alterações neuroimunoendócrinas, induzidas em camundongos submetidos a modelo de estresse crônico imprevisível. Pretende-se, ainda, verificar a participação do inflamassoma de NLRP3 nos efeitos do CBD. (AU)

Resumo

A UPRmt, do inglês mitochondrial unfolded protein response, é reconhecida como uma via intracelular adaptativa em resposta ao estresse, a qual assegura a integridade e função do proteoma mitocondrial através da ação de chaperonas e proteases mitocondriais. Estudos mutagênicos revelaram que o distúrbio causado pelo desequilíbrio estequiométrico entre proteínas do DNA mitocondrial (DNAmt) e proteínas da cadeia transportadora de elétrons codificadas pelo DNA nuclear (DNAn), é capaz de ativar a UPRmt. Em organismos como C. elegans e Drosófilas o desequilíbrio mitonuclear resulta em melhora do metabolismo celular, função mitocondrial e aumento da longevidade. A indução farmacológica do desequilíbrio mitonuclear ativa a UPRmt levando ao aumento da biossíntese e da função mitocondrial, melhorando a capacidade oxidativa em tecidos como fígado e músculo, melhorando a capacidade funcional destes órgãos. Embora a indução da UPRmt mediado pelo mecanismo de desequilíbrio mitonuclear pareça ser um processo biológico bem conservado e que cursa em melhora das funções orgânicas, os efeitos do exercício físico sobre a UPRmt e sobre o desequilíbrio mitonuclear ainda não foram explorados. Desta forma o atual projeto têm por objetivo avaliar os marcadores da UPRmt e do desequilíbrio mitonuclear no hipotálamo, coração, fígado e músculo esquelético de camundongos treinados, relacionando esse fenômeno à função mitocondrial nesses tecidos. O desenvolvimento deste projeto poderá contribuir de maneira significativa para o entendimento do papel da UPRmt sobre as adaptações orgânicas induzidas pelo treinamento físico. (AU)

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A arquitetura mitocondrial está envolvida em várias funções cruciais para a viabilidade celular, como proliferação, senescência e sinalização. Mutações que afetam esses processos são causas frequentes de doenças neurológicas, musculares, metabólicas e câncer. Em particular, a dinâmica mitocondrial através do balanço entre fusão e fissão, e a mitofagia para remoção de mitocôndrias danificadas, representam um mecanismo central para adaptação bioenergética das necessidades metabólicas da célula. O citoesqueleto e os motores moleculares têm se mostrado importantes nos processos da homeostase mitocondrial. A miosina-Va, um motor molecular dependente de F-actina, promove alguns fenótipos que remetem a um possível papel no metabolismo celular. Por exemplo, o knockdown da miosina-Va, assim como o da DRP1, uma GTPase essencial para fissão mitocondrial, torna as mitocôndrias mais alongadas, com maior taxa de respiração celular e produção de ROS e, também está ligado à diminuição da capacidade de invasão, migração e aumento das taxas de apoptose de células transformadas. Foi também demostrado que existe colocalização celular entre a miosina-Va e mitocôndrias, o que nos levou a hipótese de que a miosina-Va está envolvida nos processos de dinâmica mitocondrial, seja participando da fissão em conjunto com a F-actina, a qual é requerida no processo, ou até mesmo posicionando a DRP1 nos sítios de fissão. Além disso, a miosina-Va possui uma AAA-ATPase, a p97/VCP, como ligante, que é necessária para o processo de mitofagia dependente de Parkin, o que nos levou à uma hipótese alternativa, que a miosina-Va contribui com a homeostase mitocondrial através do processo de mitofagia. Portanto, o nosso objetivo é elucidar o papel da miosina-Va nos processos de dinâmica mitocondrial e mitofagia, e assim entender melhor como a regulação dos processos metabólicos de células neoplásicas ocorrem. (AU)

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A abundância de RNAs circulares (circRNAs) tem sido reportada recentemente em organismos de todos os domínios da vida, indicando a sua importância nas redes de regulação gênica. No domínio Archaea, Halobacterium salinarum tem se consolidado como um organismo modelo, visto a facilidade de cultivo e manipulação em laboratório, aliada a abundância de dados em escala genômica, o que permitiu estabelecer um modelo de rede de regulação gênica global. Nosso laboratório vem trabalhando na identificação e caracterização de RNAs não-codificantes neste organismo de modo a refinar os modelos de regulação gênica. Através da aquisição de dados experimentais de RNAseq, foi possível constatar a presença de um grande número de circRNAs em H. salinarum, alguns deles com possível atuação como RNAs antisense a genes importantes no metabolismo celular. Porém, para o mapeamento mais preciso dessas moléculas e exclusão de falsos positivos, faz-se necessária uma análise mais minuciosa dos dados experimentais já obtidos. Neste projeto, propõe-se a utilização de ferramentas de bioinformática para refinar o mapeamento de circRNAs e iniciar uma caracterização in silico dessas moléculas, incluindo propriedades estruturais. Estas informações deverão enriquecer o conjunto de ncRNAs identificados em H. salinarum para futuramente refinar o modelo global de regulação gênica, incluindo os circRNAs. (AU)

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A polarização fenotípica dos macrófagos entre os padrões clássico e alternativo, e a diferenciação de linfócitos T (LT) CD4+ de naïve para efetores envolvem uma profunda mudança no perfil metabólico celular, na qual a quinase ativada por monofosfato de adenosina (AMPK) desempenha um papel central. Esta proteína funciona como sensor de disponibilidade de nutrientes e reserva energética, auxiliando a célula a se adequar a situações de stress metabólico. Diversos estudos recentes vêm demonstrando a importância dessa molécula nos fenômenos de plasticidade metabólica e homeostase energética, e sua inserção em vias de sinalização com efeito contra-regulatório sobre o processo inflamatório. Diante desta multiplicidade de papeis, vislumbra-se uma possível aplicação prática da modulação dos efeitos da AMPK com finalidades terapêuticas em uma série de doenças cujos mecanismos etiopatogênicos incluem inflamação crônica e fibrose tecidual. Neste sentido, propomos investigar o papel da AMPK em macrófagos e LT CD4+ em um modelo murino de doença renal crônica (DRC). A DRC será induzida, através de alimentação enriquecida com adenina, em camundongos selvagens C57BL/6 (WT) e em camundongos com deleção do gene Ampk especificamente nos macrófagos e LT CD4+. Ao fim de 10 dias, os animais serão eutanasiados e o tecido renal será avaliado quanto aos seus aspectos histológico e imuno-histoquímico, à expressão gênica de citocinas pró-inflamatórias, moléculas pró-fibróticas e moléculas de metabolismo celular, à expressão proteica de AMPK e à caracterização do infiltrado celular. Esperamos demonstrar que a atividade metabólica mediada por AMPK influi na ativação de células fundamentais para o desenvolvimento de fibrose, e que essa descoberta traga inspirações para aplicações terapêuticas futuras. (AU)

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No contexto da reprogramação metabólica das células tumorais (efeito de Warburg), várias proteínas apresentam a sua expressão aumentada, incluindo os transportadores de monocarboxilatos (MCTs). Recentemente, o MCT1 foi identificado como o principal determinante para a sensibilidade ao 3-bromopiruvato (3-BP), um dos mais promissores inibidores do metabolismo glicolítico. O melanoma é a forma mais agressiva de câncer de pele e estudos demonstram que mutações no gene BRAF estão associadas a um aumento no risco de mortalidade em pacientes com melanomas. Importante, mutações em BRAF induzem o efeito de Warburg, sendo que esta reprogramação do metabolismo energético tem sido apontada como uma possível estratégia para o tratamento de melanomas. Neste projeto de IC, pretende-se avaliar o papel do MCT1 como mediador da resposta ao tratamento com 3-BP como agente antineoplásico para o tratamento de melanomas. Para tal, a sensibilidade de culturas primárias de melanoma ao 3-BP será avaliada e associada ao perfil metabólico das células, em especial à expressão de MCT1. O perfil metabólico das culturas primárias será também associado a mutações comuns em melanomas. (AU)

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Importantes avanços no tratamento do câncer podem surgir a partir de uma melhor compreensão das origens moleculares da doença e de alterações celulares subjacentes a transformação e multiplicação das células pré-neoplásicas. O câncer de pulmão é dos tipos mais comuns e normalmente está associado ao hábito de fumar, sendo o responsável por altas taxas de mortalidade. Em estudos do nosso grupo o benzo[a]pireno (B[a]P), um carcinógeno presente na fumaça do cigarro e amplamente difundido no meio ambiente, é utilizado como indutor de alterações malignas em células epiteliais bronquiais humanas imortalizadas (BEAS-2B). Os resultados observados no grupo demonstram que o B[a]P promove alterações no metabolismo intermediário, com queda inicial, após a primeira hora de exposição, dos níveis de NAD+, NADH, NADPH, ATP, ADP, piruvato e intermediários do ciclo de Krebs seguida pelo aumento significativo dos níveis dessas moléculas ao longo de 7 dias de incubação. Além disso, foram observadas alterações dos níveis de 5-mdC e 5-hmdC no DNA das células e aumento do crescimento de colônias em soft-agar, sem aumento da taxa de mutação no gene HPRT. Considerando-se a importância de NAD+ e NADH na regulação da atividade de diferentes proteínas, neste projeto pretende-se avaliar se a modulação dos níveis de NAD+ nas células BEAS-2B expostas a baixas concentrações de B[a]P afeta a formação de colônias em meio semissólido soft-agar e contrabalança as alterações metabólicas, epigenéticas e de expressão de alguns genes sensíveis ao balanço redox NAD+/NADH, além da expressão de proteínas envolvidas na alteração do metabolismo em células tumorais. (AU)

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O objetivo do estudo será avaliar a atividade antifúngica e citotoxicidade, em co-cultura, de biomateriais revestidos com nanopartículas de quitosana contendo moléculas de proteínas salivares encapsuladas (histatina 1, histatina 5 ou DR9RR14). Para isso, serão avaliados 4 biomateriais: 1 zirconia, 1 liga de titânio, alumínio e vanádio (Ti-6Al-4V), 1 polimetilmetacrilato e 1 silicone de adição. Corpos de prova (14 mm de diâmetro por 1,2 mm de espessura) de cada biomaterial serão preparados e divididos em dois grupos (n=3): GC: não revestidos (controle); GR: revestidos. Para cada condição experimental serão avaliadas a proliferação celular por meio do teste Alamar Blue, a viabilidade celular por meio do nível de ATP (adenosine triphosphate) e a integridade da membrana celular das células viáveis, em células epiteliais quando em co-cultura com espécies de Candida. A capacidade de formação de biofilme sobre as amostras revestidas também será avaliada por meio do teste XTT e da contagem de unidades formadoras de colônias. Além disso, para confirmação da presença do biofilme sobre as amostras, bem como para avaliação de sua espessura e presença de microrganismos viáveis, as amostras de todos os grupos serão avaliadas em microscopia confocal de verredura a laser (MCVL). Os resultados do metabolismo celular das células viáveis após o contato com os extratos dos materiais estudados, bem como os resultados para análise da capacidade de formação de biofilme, serão submetidos ao método estatístico mais adequado e o nível de significância de 5% será selecionado (±=0.05). Além disso, para cada teste de viabilidade celular, os resultados serão comparados com o controle negativo e os tratamentos nos diferentes grupos experimentais serão classificados de acordo com o efeito citotóxico em escores de 0 a 3. (AU)

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O Retardo Constitucional do Crescimento e Puberdade (RCCP) associa estatura abaixo do padrão genético familiar, velocidade de crescimento inferior à média esperada para sexo e idade e retardo da maturação esquelética. Por outro lado alguns indivíduos apresentam crescimento somático e maturação puberal mais rápidos que a média da população, padrão denominado Aceleração Constitucional do Crescimento e Puberdade (ACCP). Pacientes com RCCP apresentam balanço energético negativo, enquanto pacientes com ACCP possuem balanço energético positivo. Metabolismo celular, crescimento e balanço energético estão relacionados à eficiência mitocondrial, portanto, a função mitocondrial pode estar relacionada à velocidade de crescimento durante a infância e adolescência. Desta forma, o objetivo do projeto é analisar a função mitocondrial nos pacientes com RCCP e ACCP, bem como associar as variantes identificadas ao longo do mtDNA com as variantes do crescimento e puberdade. Como estratégia de pesquisa, utilizaremos o equipamento XFe Extracellular Flux Analyzers que é capaz de mensurar simultaneamente as duas principais vias de produção de energia da célula - respiração mitocondrial e glicólise - em uma microplaca, em tempo real e posteriormente selecionaremos pacientes com déficit na função mitocondrial para sequenciamento do genoma mitocondrial afim de identificar possíveis variantes no mtDNA que possam estar relacionados com o déficit energético. Desta forma, pretendemos estabelecer novas linhas de pesquisa e metodologias, visando o conhecimento genético, molecular e celular da mitocôndria permitindo o avanço nas investigações a respeito das variações do crescimento e puberdade. (AU)

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Proteínas de membrana são consideradas os novos desafios da Biologia Estrutural dada a sua relevância médica. Mais de 50% dos alvos da indústria farmacêutica envolvem estas proteínas as quais representam cerca de 30% dos genomas de organismos. Com o objetivo de montarmos uma plataforma para a expressão e produção de proteínas de membrana em nosso laboratório, para uso em ensaios funcionais in vitro e estudos estruturais, escolhemos como alvos transportadores do tipo ABC (do inglês, ATP_Binding Cassete), uma das maiores famílias de proteínas integrais de membrana. Transportadores ABC apresentam grande relevância médica e farmacêutica uma vez que são relacionados ao desenvolvimento do fenômeno de múltipla resistência à drogas (MDR) no tratamento do câncer, resistência bacteriana, infectividade e patogênese. Apesar de extensivamente estudados em muitos organismos, existem poucos estudos funcionais ou estruturais sobre estes transportadores em Mycobcaterium tuberculosis e Xanthomonas citri, duas bactérias patogênicas estudadas pelo nosso grupo. Em trabalhos recentes, temos evidenciado a importância de componentes da família ABC na infecção e patogenicidade de X. citri, incluindo a presença de ao menos quatro transportadores relacionados à captação de sulfato (SbpCysUWA) e compostos sulfonados (SsuABCDE). A resolução da estrutura da proteína ligadora de sulfato Sbp na presença de sulfato e ensaios biofísicos confirmaram a sua função e expressão em ensaios in vivo. Em paralelo, em trabalho realizado em colaboração com a Dra Isabel de Moraes do Laboratório de Proteínas de Membrana do Diamond Light Source e OPPF em Oxfordshire, clonamos e realizamos análises de expressão de 17 transportadores do tipo ABC de M. tuberculosis, a maioria envolvida no efluxo de drogas como também na assimilação de moléculas fundamentais para o metabolismo celular. Dada a importância destes transportadores, a ausência de dados funcionais e a experiência do nosso grupo com esta família de proteínas, este projeto visa a caracterização funcional e estrutural dos transportadores de M. tuberculosis envolvidos com o transporte de glutamina (Rv2563/Rv2564), de drogas (Rv1747), e o transportador de sulfato de X. citri (SbpCysUWA). Neste sentido, pretende-se expressar, purificar e produzir os transportadores em complexo ou os componentes isolados para resolução de suas estruturas cristalográficas e realização de estudos funcionais. Ainda, o desenvolvimento deste projeto será de grande importância para a formação de um grupo com experiência na manipulação de proteínas de membrana para estudos funcionais e estruturais, uma das grandes áreas expoentes no estudo de proteínas e carentes no Brasil. (AU)

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Transplantes aumentam a sobrevida e a qualidade de vida de pacientes crônicos em estadios terminais. Entretanto, apesar dos avanços nas técnicas cirúrgicas e das novas drogas imunossupressoras, um número significativo de pacientes aindacursam com rejeição aguda, que é fator de risco para a perda do enxerto. A perda do enxerto acarreta em dificuldade em conseguir ser transplantado novamente, pois o paciente acaba sensibilizado e desenvolve anticorpos específicos contra o doador, que é contraindicação para a realização de um novo transplante. Portanto, vias mais específicas e novas estratégias que possam aumentar a aceitação do enxerto necessitam ser estudadas. As células B apresentam um papel crucial no processo de rejeição, seja por meio da apresentação antigênica ou via produção de aloanticorpos, mas também podem estar envolvidas no processo de tolerância do enxerto, nos casos das células B reguladoras, as Bregs. Recentemente, têm se verificado que o metabolismo celular é de suma importância para a sobrevivência e ativação de células do sistema imune, como sensores metabólicos e orquestradores destas funções. Entretanto, se sabe muito pouco acerca do papel das vias metabólicas e dos sensores metabólicos, tais como AMPK e mTOR no processo de ativação e função dos linfócitos B, e menos ainda da repercussão dessas vias no transplante de órgãos. Este projeto objetiva melhor compreender a influência de vias metabólicas de células B e de seus sensores durante um modelo experimental de transplante pele, assim como estas podem vir a interferir no processo de rejeição de aloenxertos.Assim, temos como hipótese central que as vias metabólicas, AMPK e mTOR, são cruciais na ativação de linfócitos B durante o processo de rejeição ao enxerto. Nós utilizaremos ferramentas de biologia celular e molecular para dissecar a participação das vias metabólicas na ativação de linfócitos B, bem como comparar o metabolismo dos diferentes tipos de linfócitos B. Nós também avaliaremos a participação das moléculas mTOR e AMPK na ativação e diferenciação dos linfócitos B em um modelo de transplante de pele. Nós acreditamos que este projeto contribuirá para o entendimento do papel do metabolismo celular na ativação de células do sistema imune e, no futuro, poderá contribuir para o desenvolvimento de novos alvos e estratégias terapêuticas para tratamento de rejeição dos transplantes e outros processos inflamatórios. (AU)

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Candida spp. são fungos patogênicos que possuem capacidade de formar biofilmes orais. Fatores sistêmicos e extrínsecos como a má higiene oral, uso de prótese mal adaptada e xerostomia são fatores predisponentes para o desenvolvimento da candidíase. Novas alternativas de tratamento antifúngico têm sido estudadas, devido a necessidade de limitar a resistência desenvolvida aos antifúngicos existentes. Assim, a fitoterapia se apresenta potencialmente valiosa e, entre os fitoterápicos, o Terpinen-4-ol possui ação antimicrobiana e anti-inflamatória. O sistema de entrega do medicamento influencia diretamente na eficiência do tratamento e deve visar aumento na biodisponibilidade local por determinado período de tempo. O sistema precursor de cristais líquidos proporciona liberação lenta e duradoura do medicamento sobre os microrganismos, indicando uma alternativa eficaz no tratamento dessa infecção. O objetivo deste estudo será avaliar a citotoxicidade e determinar as concentrações não citotóxicas do sistema precursor de cristal líquido em associação com o Terpinen-4-ol. Será utilizada cultura celular de linhagem imortalizada de queratinócitos humanos (NOK). As células serão cultivadas em meio de cultura Dulbecco´s Modified Eagle´s Medium (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal bovino e 1% de penicilina, estreptomicina e glutamina e mantidas em incubadora a 37º C em 5% de CO2. Posteriormente será avaliada a citotoxicidade do Terpinen-4-ol utilizando-se o teste colorimétrico do MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide) para avaliação da viabilidade e proliferação celular por meio da atividade citoquímica da enzima desidrogenase succínica (SDH). Os resultados serão avaliados utilizando-se o software SPSS versão 17.0 (Chicago, IL, USA). Os dados obtidos referentes ao metabolismo celular serão avaliados em nível de significância de 5% (p <0.05). (AU)

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