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Impacto da intensidade do exercício físico iniciado precocemente após o infarto do miocárdio no processo de remodelação cardíaca

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Leonardo Antonio Mamede Zornoff
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Processo:12/22051-3
Vigência: 01 de abril de 2013 - 31 de março de 2016
Assunto(s):Insuficiência cardíaca
Resumo
O processo de remodelação cardíaca após o infarto do miocárdio está associado ao aumento de eventos cardiovasculares. Portanto, estratégias que atenuam a remodelação resultam em melhora do prognóstico pós-infarto.Diversos estudos sugerem que o exercício físico pode induzir importantes ações cardiovasculares. Evidências acumuladas em diversos modelos experimentais sugerem que o exercício físico poderia modular o processo de remodelação cardíaca após o infarto. No entanto, aspecto a ser enfatizado refere-se ao fato de que o melhor período para o início da atividade física após o infarto não é conhecido. Em estudo anterior, em comparação ao exercício físico iniciado tardiamente, o exercício físico iniciado precocemente após o infarto não resultou em benefícios em diversas variáveis do processo de remodelação. Um dos mecanismos propostos é que o exercício precoce poderia aumentar o estresse parietal e estimular o processo de remodelação. No atual protocolo, temos o intuito de analisar três diferentes intensidades de exercício iniciados precocemente (5 dias) após a oclusão coronariana. Os animais serão submetidos ao infarto sob anestesia com cloridrato de cetamina (70mg/kg) e xilazina (10mg/kg). Após quatro dias, serão divididos em 4 grupos: S, animais controle sedentários; E1, animais que serão submetidos a exercício físico leve; E2, animais que serão submetidos a exercício físico moderado e E3, animais que serão submetidos a exercício físico intenso. Após 3 meses, os animais serão submetidos a estudo ecocardiográfico. A seguir, os animais serão sacrificados com dose excessiva de pentobarbital (100mg/kg), e serão determinados o peso dos pulmões, a área seccional dos miócitos, o tamanho do infarto, a quantidade de colágeno, grau de apoptose, estresse oxidativo cardíaco, ativação das metaloproteases 2 e 9, metabolismo energético e expressão de citocinas inflamatórias cardíacas. (AU)

Efeito do estresse oxidativo no espermatozóide e relação com o desenvolvimento embrionário

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Mayra Elena Ortiz D' Avila Assumpcao
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:12/22915-8
Vigência: 01 de abril de 2013 - 30 de novembro de 2014
Assunto(s):EmbriogêneseEstresse oxidativoBiotecnologia da reproduçãoBovinos
Resumo
Tendo em vista a importância do espermatozoide no momento da fecundação e o desenvolvimento embrionário inicial, conhecer o efeito de alterações decorrentes da criopreservação, como a produção das espécies reativas de oxigênio (EROs) e respectivos efeitos nesta célula é fundamental para o aprimoramento de biotécnicas como a produção in vitro de embriões (PIV). Este estudo tem como objetivos avaliar o impacto de diferentes concentrações de agentes indutores de estresse oxidativo sobre o espermatozoide e o efeito deste estresse oxidativo nos estágios iniciais do desenvolvimento de embriões PIV. Em uma primeira fase, espermatozoides tratados e controle serão corados com sondas fluorescentes e avaliados por citometria de fluxo capilar. Variáveis espermáticas relacionadas à estrutura da cromatina (laranja de acridina), potencial mitocondrial (JC-1), integridade de membranas (FITC-PI) e capacitação espermática (clortetraticlina), além dos relacionados ao estresse oxidativo (diacetato de diclorfluoresceína, CellROX®, e C11-BODIPY) serão analisadas nesta fase. Além da citometria de fluxo microcapilar, parte do sedimento será separada para realização do ensaio de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs). Em uma segunda fase, os grupos de espermatozoides tratados com agentes indutores de estresse oxidativo e controle serão utilizados na produção in vitro de embriões buscando verificar o impacto de diferentes níveis de estresse oxidativo na fecundação in vitro e no desenvolvimento inicial do embrião. Para isto, os embriões serão avaliados com relação à velocidade de clivagem e formação de pró-núcleo. (AU)

Nitronas e hidroxilaminas com potencial farmacológico: síntese, prospecção da atividade antioxidante e estudos celulares

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Centro de Ciências Naturais e Humanas (CCNH). Universidade Federal do ABC (UFABC). Santo André, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Artur Franz Keppler
Área do conhecimento:Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Orgânica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Apoio a Jovens Pesquisadores
Processo:12/07717-5
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2017
Assunto(s):Síntese orgânicaHidroxilaminasEstresse oxidativoHidroxilaminaPeptídeos
Resumo
Foi postulado que o acumulo de proteínas oxidadas e de DNA mitocondrial danifcados são fatores que contribuem ativamente para o processo de envelhecimento. A resposta fisiológica para o avanço da idade é o aumento exponencial na incidência de enfarto, derrames, câncer, Alzheimer e Parkinson. Apesar de não existir um elo entre essas doenças, evidências experimentais indicam que espécies radicalares participam ativamente no desencadeamento das mesmas. O objetivo deste projeto é sintetizar uma série de moléculas inéditas contendo os grupos funcionais nitrona e hidroxilamina, os quais apresentam atividade farmacológica frente a modelos de eventos fisiológicos e doenças relacionadas ao estresse oxidativo. O presente projeto tem como foco a síntese orgânica aplicada, levando em consideração aspectos farmacológicos e mercadológicos, cuja essência é o emprego de uma abordagem sintética onde aminoácidos, fármacos comerciais e peptídeos serão utilizados como plataformas sintéticas. Como o efeito fisiológico e farmacológico de nitronas e hidroxilaminas ainda não está estabelecido, serão realizados estudos comparativos entre essa biblioteca de novas moléculas com nitronas, hidroxilaminas e antioxidantes de referência, para avaliar a relação estrutura/atividade farmacológica dessas novas moléculas, de acordo com o grau de proteção oferecido quando um modelo celular estiver exposto à danos oxidativos induzidos. (AU)

Influência da suplementação de tomate e licopeno na remodelação cardíaca após infarto agudo do miocárdio

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Marcos Ferreira Minicucci
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/17414-0
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):CardiologiaCardiopatiasInfarto do miocárdioInsuficiência cardíacaRemodelação ventricularLicopenoTomateEstresse oxidativoMicroRNAs
Resumo
As doenças cardiovasculares são as principais causas de morte no mundo e estima-se que, em 2030, elas serão responsáveis por aproximadamente 23,6 milhões de óbitos. Dentre as doenças cardiovasculares, podemos destacar as síndromes coronarianas agudas, principalmente o infarto agudo do miocárdio (IAM). A insuficiência cardíaca é uma frequente complicação após o IAM e diversos fatores influenciam o seu desenvolvimento, sendo que a remodelação cardíaca apresenta papel de destaque nesse cenário. O aumento do estresse oxidativo e do processo inflamatório estão associados com a remodelação cardíaca após o IAM. Devido ao grande impacto sócio econômico e às altas taxas de mortalidade, torna-se relevante a identificação de outros fatores que modulem o processo de remodelação cardíaca. Entre esses fatores destacam-se a suplementação de alimentos com propriedades antioxidantes, como o tomate (Lycopersiconesculentum), e um de seus principais constituintes, o licopeno. No entanto, a influência do tomate e do licopeno na remodelação cardíaca após o IAM ainda não foi estudada. Nosso objetivo é avaliar a influência da suplementação de tomate e licopeno na remodelação cardíaca após infarto agudo do miocárdio, em relação às variáveis morfológicas e funcionais, ao estresse oxidativo, processo inflamatório e microRNAs. (AU)

Influência da N-acetilcisteína sobre a sinalização de apoptose na musculatura esquelética de ratos com insuficiência cardíaca crônica

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Marina Politi Okoshi
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/21687-1
Vigência: 01 de março de 2013 - 30 de junho de 2015
Assunto(s):CardiologiaInsuficiência cardíacaInfarto do miocárdioMúsculo esqueléticoApoptoseGlutationa
Resumo
Embora apoptose de fibras musculares esqueléticas seja frequentemente observada naIC, poucos estudos avaliaram mecanismos responsáveis por sua ocorrência. Um dos fatoresque ativa vias de sinalização de apoptose é o estresse oxidativo. Vários trabalhos descreveramrelação entre concentração intracelular de glutationa e apoptose. A N-acetilcisteína (NAC)constitui importante fonte de cisteína para a síntese de glutationa. Sua administração podenormalizar os níveis de glutationa total no coração de ratos infartados e reduzir marcadores de estresse oxidativo. Neste estudo, verificaremos se o tratamento com N-acetilcisteínarestabelece o conteúdo e o estado redox da glutationa e inibe ou atenua mecanismosmoleculares envolvidos na apoptose em músculo esquelético de ratos com IC induzida porinfarto do miocárdio (IM). Serão constituídos três grupos de ratos: controle (sham), IM-C(sem tratamento) e IM-NAC (tratado com NAC por dois meses). O músculo gastrocnêmio porção branca) será avaliado seis meses após a indução do IM. Disfunção ventricular será confirmada por estudo ecocardiográfico e IC por dados anátomo-patológicos. A atividade das enzimas antioxidantes será avaliada por espectrofotometria. A geração total de espéciesreativas de oxigênio será avaliada pela quantificação dos produtos derivados de oxidação do dihidroetídio por HPLC. O conteúdo de glutationa muscular, a concentração sérica de TNF-± e a fragmentação de DNA serão avaliados por meio de kits comercialmente disponíveis. Aexpressão de proteínas de vias de sinalização de apoptose será mensurada por Western blot e adistribuição das isoformas das cadeias pesadas de miosina por eletroforese em gel de poliacrilamida. Análise estatística: ANOVA e Bonferroni. (AU)

A teobromina pode estimular SIRT1 (silent information regulator 1) e reduzir o estresse oxidativo e fibrose renal associados ao diabetes mellitus?

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Jose Butori Lopes de Faria
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/22452-8
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):NefrologiaEstresse oxidativoNefropatias diabéticasPolifenóis
Resumo
O estresse oxidativo induzido pela hiperglicemia causa acúmulo renal de matriz extracelular (MEC) com progressão para fibrose e falência renal, alterações características da nefropatia diabética. Como parte do nosso projeto temático (2008/57560-0), nós observamos que não apenas o tratamento com o cacau rico em polifenóis (60%), mas também o cacau pobre em polifenóis (0,5%) foram capazes de prevenir o estresse oxidativo e o acúmulo renal de MEC em ratos diabéticos, assim como, em células mesangiais expostas a alta concentração de glicose. Além disso, a atividade da deacetilase-dependente de NAD+ como a Sirt1 (silent information regulator 1), em células mesangiais expostas a alta glicose, foi reduzida e isso foi revertido com o tratamento com o cacau rico ou pobre em polifenol. Análise por UPLC e espectrometria de massa do cacau pobre em polifenóis, identificaram a teobromina como o possível composto responsável pelas suas ações benéficas. Os objetivos do presente trabalho são: I) investigar a ação da teobromina no estresse oxidativo e índices de lesão renal em ratos diabéticos; II) testar a contribuição da Sirt1 como mediadora dos possíveis efeitos benéficos do cacau e da teobromina na melhora da lesão renal de ratos diabéticos, assim como em células mesangiais expostas a alta glicose. Diabetes mellitus (DM) será induzido através da injeção endovenosa de estreptozotocina em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) com 12 semanas de idade. Os ratos diabéticos e os seus controles, que receberão o veículo da estreptozotocina (tampão citrato pH 4,5) e serão randomizados para serem tratados ou não com teobromina ou cacau por 16 semanas. Células mesangiais humanas serão cultivadas em glicose normal (5,6 mM) ou alta (30 mM) na presença ou ausência de cacau ou teobromina e inibidores de Sirt1 ou AMPK ou CaM-KK ou ativador de AMPK. A contribuição da Sirt1 para os mecanismos de ação do cacau ou da teobromina no estresse oxidativo, apoptose e fibrose serão avaliados por imunoprecipitação do Foxo3 ou Foxo4 acetilado, ou p53 acetilado assim como Smad3 acetilado. A identificação da via Sirt1 como um mecanismo de ação do cacau e da teobromina na melhora do estresse oxidativo e lesão renal no DM representa as bases fisiopatológicas para o emprego dessas manobras na prevenção e tratamento da nefropatia diabética. (AU)

Mecanismos da infertilidade causada por gossipol em ratos e efeito protetor da vitamina E

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus Experimental de Dracena. Dracena, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Fábio Erminio Mingatto
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/22684-6
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):Estresse OxidativoFertilidadeGossipolVitamina EMitocôndrias
Resumo
O farelo do algodão (Gossypium sp) representa mundialmente a segunda mais importante fonte ou suplemento protéico disponível para a alimentação animal, ultrapassada apenas pela soja. O gossipol é uma substância fenólica tóxica presente na semente de algodão que tem mostrado reduzir a fertilidade em animais de produção. Neste sentido, é essencial elucidar as características toxicológicas do gossipol, afim de que o farelo de algodão possa ser utilizado de forma segura pelos produtores, sem prejudicar o desempenho dos animais. Em função destes aspectos este trabalho tem o objetivo de avaliar os efeitos do gossipol sobre a produção de espermatozóides de ratos incluindo avaliação de danos causados no homogenato e nas mitocôndrias isoladas de testículos, além de analisar a ação da vitamina E na inibição dos efeitos tóxicos do gossipol. Serão utilizados 4 grupos com 6 animais cada, sendo eles G1(controle): animais tratados com óleo de canola ; G2(TG): receberá solução de Gossipol Ácido Acético dissolvido em óleo de canola como veículo (40 mg/kg de peso vivo); G3(TE): receberá solução contendo vitamina E dissolvida em óleo de canola como veículo (100 mg/kg de peso vivo); G4(TG+E) receberá solução de Gossipol Ácido Acético (40 mg/kg de peso vivo) e solução contendo vitamina E (100 mg/kg de peso vivo). O tratamento terá duração de 15 dias e ao final serão realizadas análises de concentração de espermatozóides, atividade das enzimas glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR), determinação dos níveis de GSH e GSSG, avaliação da lipoperoxidação e determinação de grupos tióis de proteínas no homogenato dos testículos, além da respiração mitocondrial, potencial de membrana e síntese de ATP em mitocôndrias isoladas de testículo. (AU)

Avaliação do potencial da semente e do óleo de chia (Sálvia hispanica L.) na prevenção e no tratamento da obesidade e comorbidades induzida por dieta hiperlipídica e hiperglicídica in vivo

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Engenharia de Alimentos (FEA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Mário Roberto Maróstica Junior
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Nutrição - Bioquímica da Nutrição
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/23813-4
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):Suplementação alimentarObesidadeÁcidos graxos omega 3Resistência à insulinaEstresse oxidativo
Resumo
A diversidade de compostos bioativos presentes nos alimentos e a ampla aplicação terapêutica destes justificam a busca por conhecimentos relacionados às propriedades fisiológicas ou funcionais. A Chia (Salvia hispanica L.) é uma antiga planta herbácea, com alto teor de óleo e ácido graxo alfa-linolênico, que tem sido recentemente estudada por sua importante composição nutricional, possível aplicação em alimentos, potencial funcional e por seus efeitos benéficos à saúde. O objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos da suplementação com a semente e o óleo de Chia sobre mecanismos fisiológicos e moleculares na prevenção e tratamento da obesidade e comorbidades induzida por dieta em modelo animal. Será realizado um ensaio biológico, com 48 ratos machos Wistar, que serão divididos em 6 grupos (n=8) e alimentados com dieta hiperlipídica (HF) (35%) e adicionada de frutose (HFr) (20%). O tempo do ensaio será de 16 semanas, sendo 4 semanas para o crescimento, e 12 semanas de experimento. Os grupos de prevenção permanecerão durante as 12 semanas em suplementação com os produtos da Chia, e os grupos de tratamento durante 6 semanas, após as 6 semanas de indução da obesidade. Serão avaliados: ingestão alimentar, ganho de peso, perfil lipídico e hormonal, resistência à insulina, tolerância à glicose, estresse oxidativo, peroxidação lipídica, mecanismos moleculares da via inflamatória; assim como a caracterização química e a capacidade antioxidante das matérias-primas. Os resultados serão submetidos à análise de variância ANOVA e as médias dos tratamentos serão comparadas pelo teste de Tukey, com significância menor ou igual a 0,05. O projeto será executado entre o primeiro semestre de 2013 e o segundo semestre de 2014. (AU)

Efetividade de um programa de intervenção dietética sobre a atividade de doença, perfil metabólico e estresse oxidativo em pacientes com artrite psoriásica e psoríase em atividade: um ensaio clínico, randomizado e placebo-controlado

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Marcelo de Medeiros Pinheiro
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Nutrição - Análise Nutricional de População
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/18701-2
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):ReumatologiaPsoríaseArtrite psoriásicaSíndrome X metabólicaEstresse oxidativo
Resumo
A psoríase (Ps) e a artrite psoriásica (AP) estão associadas com maior risco de síndrome metabólica (SMet), adiposidade corporal e mortalidade cardiovascular. Em todas essas condições há incremento do estresse oxidativo e a inflamação é apontada como um dos principais mecanismos fisiopatogênicos envolvidos. No entanto, pouco se sabe sobre a influência da dieta e dos micronutrientes sobre os principais desfechos dessas doenças. Objetivos: Avaliar a efetividade de um programa de intervenção dietética sobre a atividade de doença, perfil metabólico e estresse oxidativo em pacientes com Ps e AP. Pacientes e métodos: Serão incluídos 97 pacientes com Ps e 97 pacientes com AP, por meio de ensaio clínico, randomizado e placebo-controlado, com 12 semanas de intervenção. Cada cenário da doença (Ps e AP) será randomizado, na proporção de 1:1:1, em três grupos: GD (apenas dieta), GDS (dieta e suplementação de óleo de peixe) e GP (placebo). Pacientes com doenças hepáticas, pulmonares e renais crônicas serão excluídos, bem como aqueles em tratamento nutricional ou em uso de medicações anabolizantes e consumo de suplementos protéicos, vitamínicos ou de antioxidantes. As características da doença e os fatores de risco para SMet, bem como detalhes das doenças concomitantes e medicações associadas serão avaliados por meio de questionário padrão. Serão avaliados o consumo alimentar, dados antropométricos e atividade física. A composição corporal será avaliada por absorciometria do corpo total por dupla emissão de raios X (DXA; GE-Lunar, DPX-MD+). A atividade e gravidade da doença serão avaliadas por meio do PASI (Psoriasis Area Severity Index), DAS28-PCR (Disease Activity Score) e HAQ (Health Assessment Questionnaire). Além disso, a avaliação bioquímica incluirá anti-LDL e anti-LDLoxidada, insulina, apolipoproteína A e B, adiponectina, malondialdeído e dienos conjugados, dano oxidativo ao DNA e RAGE solúvel. As avaliações serão feitas em dois momentos (linha de base e 12 semanas após). Para a análise estatística, serão usados média e desvio-padrão, teste Kolmogorov-Smirnov, teste t-student, correlação de Pearson, teste qui-quadrado ou teste exato de Fisher e ANOVA. A análise de intenção de tratar será usada para a análise final dos dados. O valor de significância será p<0,05. (AU)

Influência da N-acetilcisteína sobre a apoptose na musculatura esquelética de ratos com insuficiência cardíaca crônica

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Paula Felippe Martinez
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/23936-9
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):GlutationaSistema musculoesqueléticoRatosApoptoseCardiologia
Resumo
Embora apoptose de fibras musculares esqueléticas seja frequentemente observada na IC, poucos estudos avaliaram mecanismos responsáveis por sua ocorrência. Um dos fatores que ativa vias de sinalização de apoptose é o estresse oxidativo. Vários trabalhos descreveram relação entre concentração intracelular de glutationa e apoptose. A N-acetilcisteína (NAC) constitui importante fonte de cisteína para a síntese de glutationa. Sua administração pode normalizar os níveis de glutationa total no coração de ratos infartados e reduzir marcadores de estresse oxidativo. Neste estudo, verificaremos se o tratamento com N-acetilcisteína restabelece o conteúdo e o estado redox da glutationa e inibe ou atenua a apoptose em músculo esquelético de ratos com IC induzida por infarto do miocárdio (IM). Serão constituídos três grupos de ratos: controle (sham), IM-C (sem tratamento) e IM-NAC (tratado com NAC por dois meses). O músculo gastrocnêmio (porção branca) será avaliado seis meses após a indução do IM. Disfunção ventricular será confirmada por estudo ecocardiográfico e IC por dados anátomo-patológicos. As áreas seccionais das fibras do músculo gastrocnêmio (porção branca) serão mensuradas em cortes histológicos corados com hematoxilina-eosina. O conteúdo de glutationa muscular e a fragmentação de DNA serão avaliados por meio de kits comercialmente disponíveis. A expressão proteica de caspases, marcadores de apoptose, e de repressor de apoptose com domínio de recrutamento de caspase (ARC), proteína anti-apoptótica, será mensurada por Western blot. Análise estatística: ANOVA e Bonferroni. (AU)

Transferência de citoplasma submetido ao estresse oxidativo como modelo para o estudo da herança de doenças mitocondriais

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Marcos Roberto Chiaratti
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:12/12951-7
Vigência: 01 de março de 2013 - 30 de setembro de 2014
Assunto(s):Doenças mitocondriaisDNA mitocondrialGenes mitocondriaisAutofagia
Resumo
Patologias causadas por mutações no DNA mitocondrial (mtDNA) representam um importante grupo de doenças genéticas em humanos. Todavia, devido ao padrão de segregação distinto do mtDNA, não existem métodos eficientes que permitam prever ou intervir na herança destas patologias. Isso se deve, principalmente, ao desconhecimento dos mecanismos moleculares que governam a herança mitocondrial em mamíferos. Estudos recentes indicam que mtDNA portador de mutação com grave efeito sobre a função da organela é seletivamente eliminado da linhagem germinativa feminina durante a oogênese. Os mecanismos envolvidos neste processo ainda são desconhecidos, mas diversas evidências sugerem que o mtDNA mutante é eliminado com base no seu efeito sobre a função da organela. Em células somáticas a fusão e fissão de mitocôndrias são responsáveis por separar em organelas distintas mtDNAs mutantes dos selvagens. Neste caso, quando as mutações resultam em disfunção da organela, a célula é capaz de identificar e eliminar por autofagia as mitocôndrias portadoras de moléculas mutantes. Similarmente, as mitocôndrias introduzidas pelo espermatozoide no oócito são eliminadas por autofagia imediatamente após a fecundação. Portanto, nossa hipótese é que a autofagia poderia estar envolvida também na eliminação de mtDNAs mutantes advindos do oócito. Sendo assim, o presente projeto propõe investigar a capacidade do embrião de camundongo em identificar e eliminar mitocôndrias disfuncionais durante o desenvolvimento embrionário inicial. Para tanto, zigotos portadores de mtDNA da linhagem NZB/BINJ serão fotossensibilizados com azul de metileno, que gera oxigênio singlete, e parte do citoplasma fotossensibilizado será introduzido em zigotos portadores de mtDNA da linhagem C57BL/6. Os embriões produzidos por transferência de citoplasma serão cultivados in vitro para análise do desenvolvimento a blastocisto, número de cópias de mtDNA e heteroplasmia mitocondrial. O presente projeto deve contribuir para o conhecimento das bases moleculares que regem a herança mitocondrial, o que tem implicação para a prevenção e intervenção sobre a herança de severas patologias humanas causadas por mutações no mtDNA. (AU)

Análise das possíveis alterações do metabolismo de lisina induzidas pelo cádmio em milho (Zea mays)

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Ricardo Antunes de Azevedo
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Agronomia
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Processo:12/23981-4
Vigência: 01 de março de 2013 - 30 de novembro de 2015
Assunto(s):MilhoEstresse oxidativoLisina
Resumo
Nosso laboratório vem realizando estudos basicamente inseridos em duas principais linhas de pesquisa. Uma é a avaliação das alterações fisiológicas e bioquímicas, geradas pelo estresse oxidativo, ocasionado por metais pesados em plantas. A outra se baseia no estudo do metabolismo de aminoácidos essenciais, em especial a lisina, em cereais. Durante esses anos, estas duas linhas de pesquisa foram desenvolvidas separadamente, de maneira que, a análise das modificações geradas pelo estresse oxidativo concomitantemente com a análise da via metabólica da lisina ainda não foi realizada. Assim, a ideia deste projeto surgiu e baseia-se na junção destas duas linhas de pesquisa para elucidar algumas questões como: existem alterações no metabolismo da lisina em plantas de milho expostas ao cádmio (Cd)? Existe a translocação do metal para os grãos? Esta translocação ou mesmo o fato do cultivo da planta na presença de um metal tóxico pode afetar a síntese e acúmulo das proteínas de reserva do grão? Qual o efeito, nestas plantas, sobre as ações das principais enzimas antioxidantes? (AU)

O papel da melatonina exógena no meio de maturação in vitro de oócitos bovino e suíno: determinação e quantificação dos principais metabólitos por espectrometria de massas

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Claudia Lima Verde Leal
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Processo:12/20843-0
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2014
Assunto(s):Espectrometria de massasMaturação in vitroMelatonina
Resumo
O desenvolvimento de novas tecnologias na produção animal, assim como o conhecimento dos sistemas biológicos, são pesquisas relevantes para o progresso das biotecnologias do setor agropecuário no Brasil. Nesta atividade econômica, a área de reprodução animal tem especial interesse devido ao seu impacto na produção animal. Neste projeto, propomos a análise do perfil metabolômico da melatonina exógena e de seus possíveis metabólitos gerados em meio de maturação in vitro em oócitos da espécie bovina e suína, utilizando para tal o desenvolvimento, validação e aplicação de uma metodologia analítica de alta confiabilidade baseada em cromatografia líquida e espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS). A melatonina é um hormônio de significativa importância biológica, mas com funções pouco elucidadas no desenvolvimento oocitário e embrionário de bovinos e suínos. O método de HPLC-MS/MS desenvolvido será aplicado também na análise comparativa entre as amostras de fluído folicular obtidas das mesmas espécies e em diferentes fases do desenvolvimento, de forma a elucidar o papel da melatonina na competência oocitária e confirmar a faixa fisiológica desses metabólitos. Estudos apresentados na literatura mostram que a maturação in vitro pode ser prejudicada por estresse oxidativo causado por espécies reativas de oxigênio, frente às quais a melatonina pode apresentar efeito inativante. Resultados prévios com análise de líquido folicular bovino mostraram que a análise pelo método proposto (HPLC-MS/MS) apresentou uma linearidade com coeficiente de regressão maior que 0,99 para ambos os metabólitos propostos. Os limites de quantificação (LOQ) foram de 2.5 pg.mL-1 para os metabólitos AFMK e AMK, 5 pg.mL-1 para melatonina e 12.5 pg.mL-1 para 6HMEL e NAS, respectivamente. Os limites de detecção (LOD) foram de 0,75 pg.mL-1 para os metabólitos AFMK e AMK, 1,5 pg.mL-1 para melatonina e 3,75 pg.mL-1 para 6HMEL e NAS, respectivamente. Esses dados proporcionam o início da compreensão dos padrões fisiológicos da melatonina e de seus metabólitos em líquido folicular bovino e nos permite a questionar a atuação da melatonina em experimentos in vitro como na maturação oocitária. Esses dados ainda nos permitem delinear o possível mecanismo e suas interações da melatonina e de seus metabólitos frente às variadas condições de estresse e tentar elucidar os possíveis mecanismos desempenhados por esses compostos no sucesso do sucesso da produção in vitro de embriões bovinos. (AU)

Efeito de microperoxidases na expressão de enzimas antioxidantes: estudos com diferentes agentes carreadores marcados com quantum dots

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Centro de Ciências Naturais e Humanas (CCNH). Universidade Federal do ABC (UFABC). Santo André, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Iseli Lourenço Nantes
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Biofísica - Radiologia e Fotobiologia
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Processo:12/19004-3
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):Citometria de fluxoExpressão gênica
Resumo
As proteínas celulares estão sujeitas a processos de turnover por meio da digestão da cadeia peptídica para reutilização de seus aminoácidos constituintes na construção de novas proteínas. Contudo, a digestão de proteínas no ambiente celular gera peptídios que, em alguns casos, apresentam papel sinalizador intracelular que podem levar a mudanças no perfil de expressão e no silenciamento de genes. A digestão intracelular de proteínas pode ocorrer nos proteassomos que degrada as proteínas ubiquitinadas e nos lisossomos. Os lisossomos digerem proteínas que tenham sido endocitadas após sua fusão com o endossomo e também digerem as proteínas presentes nas organelas que são alvo do processo de autofagia incluindo a mitofagia de mitocôndrias envelhecidas. Nesse cenário, espera-se que haja liberação e digestão de citocromo c com produção de vários peptídios incluindo os peptídios ligados ao grupo heme denominados microperoxidases e que possuem potencial prooxidante. O presente projeto tem por objetivo verificar se os fragmentos trípticos de citocromo c contendo o grupo heme, ou seja, as microperoxidases, podem alterar a expressão gênica de enzimas antioxidantes. Essa investigação será correlacionada com a capacidade de promover estresse oxidativo que possa culminar com morte celular. Na primeira etapa, determinaremos os carreadores mais apropriados para entrega da microperoxidase e citocromo c via endocitose de tal forma que a mesma seja direcionada aos lisossomos, local, onde se espera sejam formados os fragmentos de citocromo c após autofagia das mitocôndrias e digestão de suas proteínas. Faremos uma comparação com entrega que resulte na localização citosólica dos fragmentos, possivelmente eletroporação. Essa entrega será acompanhada por microscopia confocal para seguir os carreadores marcados com quantum dots em presença de colocalizadores lisossomais. Nessa etapa serão determinados também os mecanismos de morte no caso desse evento ser disparado pela entrega de microperoxidases e citocromo c. Na segunda etapa, definidos os protocolos de entrega mais apropriados, passaremos aos estudos de expressão gênica. Esses estudos serão feitos em comparação com alterações de expressão gênica promovida por indutores de autofagia como rapamicina e tamoxifeno. (AU)

Eficácia terapêutica do exercício físico adjuntivo a farmacoterapia na depressão maior e associação com biomarcadores

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Ricardo Alberto Moreno
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Psiquiatria
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Processo:13/02951-2
Vigência: 01 de março de 2013 - 31 de outubro de 2014
Assunto(s):Fármacos neuroprotetoresBiomarcadoresExercício físicoTranstorno depressivo maior
Resumo
Descrição dos objetivos:Objetivos gerais do projeto de pesquisa:Investigar variáveis que forneçam informações sobre biomarcadores envolvidos na fisiopatologia da depressão e resposta terapêutica ao exercício. Esperamos encontrar mudanças nos biomarcadores associados a potenciais mecanismos de neuroproteção (citocinas, marcadores de estresse oxidativo, BDNF, cortisol) ao término do programa de exercícios e o papel na terapêutica da depressão.Objetivos gerais da solicitação de bolsa de Treinamento Técnico:Os objetivos do projeto de pesquisa são extensos e há a necessidade de uma pessoa com dedicação exclusiva em seu desenvolvimento. O beneficiário da bolsa será treinado para aplicação de escalas, análise dos dados obtidos a partir das mesmas e, ainda, na aplicação do treinamento físico. Justificativa para o nível de Bolsa TT - 3:Em virtude da complexidade e tempo gasto na aplicação de escalas, do treinamento e análise dos dados obtidos no projeto de pesquisa, é necessário uma pessoa já graduada em área correlata, sem vínculo empregatício e com dedicação exclusiva de 40 horas semanais às atividades de apoio ao desenvolvimento do projeto de pesquisa.Plano de Trabalho incluindo metodologia: Meses 1-12:*Recrutamento de pacientes que preenchem os critérios para inclusão no estudo (citado no item Material e método)*Revisão de literatura: associação entre exercício físico aeróbio controlado e pacientes com diagnóstico de TDM.*Acompanhamento da prática dos exercícios físicos (programa individualizado/personalizado de treinamento com base nos parâmetros fisiológicos obtidos na avaliação inicial) - (ergoespirometria) - com freqüência de 4 vezes por semana e duração de 4 semanas, com intensidade e volume determinados pela avaliação fisiológica do exercício inicial e monitorados pela freqüência cardíaca de treinamento.*Coleta de plasma para dosagem de IL-6, IL1², TNF-±, BDNF, parâmetros oxidativos e cortisol. As coletas de plasma sanguíneo para análise laboratorial serão realizadas no primeiro e último dia do treinamento físico individualizado proposto.Meses 13-24:*Seguimento ao acompanhamento da prática dos exercícios físicos.*Análise dos resultados estatísticos.*Publicação de artigo em revista especializada.Acompanhamento de desempenhoO desempenho e dedicação do técnico ao seu aprendizado e desenvolvimento do projeto de pesquisa serão avaliados diariamente, verificando a sua presença no grupo de pesquisa, participação e cooperação com a equipe e a qualidade dos resultados alcançados com o seu trabalho, além de socialização com outros participantes do grupo e qualidade do acompanhamento nos treinos aeróbios como agente motivador. Mensalmente, o técnico deverá reunir-se com a coordenadoria do projeto e apresentar um relatório, no qual consta uma descrição breve das atividades realizadas no período, objetivos alcançados, dificuldades e perspectivas.O técnico em treinamento deverá participar das reuniões científicas semanais do nosso grupo de pesquisa onde são discutidos projetos em desenvolvimento de todos os participantes do grupo, bem como artigos publicados em jornais de referência internacional , discussão de temas associados ao grupo. (AU)

Estudo de lesão por estresse oxidativo no DNA nuclear e mitocondrial em células xpg-cs

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Carlos Frederico Martins Menck
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:13/03729-1
Vigência: 01 de março de 2013 - 31 de maio de 2014
Assunto(s):Degeneração neural
Resumo
O DNA está constantemente exposto a agentes que podem provocar sérias lesões a material genético. Devido à necessidade de manter a integridade do genoma, para a correta modulação de processos vitais, nossas células dispõe de mecanismos de reparo de DNA, que corrigem as lesões causadas pelos agentes endógenos ou exógenos. Os agentes endógenos mais comuns são as espécies reativas de oxigênio (ROS - reactive oxygen species), originárias principalmente das mitocôndrias, que oxidam bases, açucares, fosfatos e podendo também gerar quebras em uma das fitas (SSBs - single-strand breaks) ou nas duas (DSBs - double-strand breaks). Pesquisas recentes mostram que as bases oxidadas em DNA nuclear e mitocondrial podem estar associadas a doenças genéticas que provocam envelhecimento precoce e neurodegeneração. De fato, há ainda polêmicas se esses processos são desencadeados por lesões em DNA nuclear ou mitocondrial [2]. Este projeto será desenvolvido pela indução de estresse oxidativo por azul de metileno (MB - methylene blue) em células mutadas no gene XPG, proveniente de paciente xeroderma pigmentosum com sintomas de fotossensibilidade e neurodegeneração (também chamado como XPG/CS). Além das lesões nucleares, pretendemos visualizar danos na mitocôndria e no mtDNA, buscando estabelecer uma correlação entre essas lesões e a indução de morte celular. Nossa expectativa é poder contribuir com a compreensão das causas do processo de envelhecimento precoce e neurodegeneração, e a ausência de reparo de DNA nessas células. (AU)

Análise de inflamassoma induzido por urato monosódico em monócitos de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Maria Terezinha Serrão Peraçoli
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:12/21287-3
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):Interleucina-18Interleucina-1Pré-eclâmpsia
Resumo
A pré-eclâmpsia (PE) é uma complicação clínica da gravidez, caracterizada por hipertensão e proteinúria, identificadas após a 20a. semana de gestação. Essa patologia está associada com hiperuricemia, valores séricos elevados de citocinas inflamatórias, ativação de leucócitos e estresse oxidativo. Níveis elevados de ácido úrico no plasma de gestantes com PE têm sido considerados não apenas como um marcador de gravidade, mas representam uma contribuição direta para a patogênese da PE. Cristais de ácido úrico podem ativar um complexo intracelular denominado inflamassomo, uma estrutura multi-protéica, importante para o processamento e liberação das citocinas inflamatórias IL-1beta e IL-18. Receptores Nod-like ou NLR (proteína contendo domínio de oligomerização nucleotídica), são proteínas citosólicas, presentes em células da imunidade inata, que reconhecem padrões moleculares associados a patógenos ou produtos endógenos citoplasmáticos e recrutam outras proteínas, formando complexos de sinalização que promovem a inflamação. O presente projeto tem como objetivos: a) Avaliar o estado de ativação, endógena e induzida por urato monossódico, de monócitos em gestantes portadoras de pré-eclâmpsia pela presença de inflamassomo NLRP1/NLRP3 e associação com a produção de IL-1beta, TNF-alfa e IL-18 por essas células; b) Correlacionar os níveis plasmáticos de ácido úrico com a ativação do inflamassomo e produção de citocinas inflamatórias por monócitos de gestantes com PE. Serão estudadas 46 gestantes, sendo 23 normotensas e 23 portadoras de pré-eclâmpsia, pareadas pela idade gestacional e 23 mulheres saudáveis não grávidas. Monócitos de sangue periférico serão incubados a 37oC, em atmosfera constante de 5% de CO2, na presença ou ausência de urato monosódico. O sobrenadante obtido após 18h de cultivo será aspirado e empregado para dosagem das citocinas TNF-alfa, IL-1beta e IL-18 pela técnica de ELISA. A presença de inflamassomo nessas células será avaliada pela expressão gênica de NLRP1/NLRP3, ASC, caspase-1, IL-1beta, IL-18 e TNF-alfa por PCR em tempo real (qPCR)logo após a coleta do sangue (expressão endógena) ou após ativação in vitro com urato monosódico (expressão ativada). (AU)

Influência da suplementação de tomate e licopeno na remodelação cardíaca após infarto agudo do miocárdio

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Marcos Ferreira Minicucci
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:12/16471-0
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):CardiologiaInsuficiência cardíaca
Resumo
As doenças cardiovasculares são as principais causas de morte no mundo e estima-se que, em 2030, elas serão responsáveis por aproximadamente 23,6 milhões de óbitos. Dentre as doenças cardiovasculares, podemos destacar as síndromes coronarianas agudas, principalmente o infarto agudo do miocárdio (IAM). A insuficiência cardíaca é uma frequente complicação após o IAM e diversos fatores influenciam o seu desenvolvimento, sendo que a remodelação cardíaca apresenta papel de destaque nesse cenário. O aumento do estresse oxidativo e do processo inflamatório estão associados com a remodelação cardíaca após o IAM. Devido ao grande impacto sócio econômico e às altas taxas de mortalidade, torna-se relevante a identificação de outros fatores que modulem o processo de remodelação cardíaca. Entre esses fatores destacam-se a suplementação de alimentos com propriedades antioxidantes, como o tomate (Lycopersicon esculentum), e um de seus principais constituintes, o licopeno. No entanto, a influência do tomate e do licopeno na remodelação cardíaca após o IAM ainda não foi estudada. (AU)

Efeito da solução salina hipertônica na lesão de isquemia/ reperfusão hepática com hipotermia em modelo experimental em ratos

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Estela Regina Ramos Figueira
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Cirurgia
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/22420-9
Vigência: 01 de março de 2013 - 31 de dezembro de 2013
Assunto(s):HipotermiaFígado
Resumo
Introdução: A lesão de isquemia/reperfusão (I/R) do fígado caracterizada pelo agravamento da lesão hepatocelular após a revascularização do órgão. Isto ocorre em várias situações clínicas como cirurgias de ressecção hepática, choque hemorrágico e no transplante de fígado (TF). Algumas estratégias tem sido desenvolvidas para minimizar a lesão hepática. As soluções salinas hipertônicas apresentam propriedades antioxidantes com efeitos sobre neutrófilos, macrófagos e células endoteliais e, consequentemente na microcirculação. Paralelamente, embora o resfriamento do órgão, base da preservação de órgãos, tenha efeito protetor da lesão de IR, sabe-se que nessa situação há maior edema celular com prejuízo da microcirculação, o que pode levar a um prejuízo da macrocirculação hepática.Objetivo: Avaliar o efeito da solução salina hipertônica (NaCl 7,5%) na lesão de isquemia reperfusão hepática com hipotermia.Métodos: Serão estudados ratos Wistar machos, divididos nos seguintes grupos: Grupo Sham (sham): animais submetidos a laparotomia e manipulação do fígado; grupo Controle da Ressecção (CR): animais submetidos à ressecção dos lobos direito e caudado; grupo Controle da Isquemia Quente (CIQ): animais serão submetidos a 40 min de isquemia parcial quente do fígado, seguida de ressecção dos lobos não-isquemiados (direito e caudado); grupo Controle da Isquemia com Hipotermia (CIH): animais serão submetidos a 40 min de isquemia com hipotermia a 10ÚC, seguida de ressecção dos lobos não-isquemiados; grupo Isquemia Quente + Solução Salina Hipertônica a 7,5% (QHTS): animais serão submetidos a 40 min de isquemia quente e tratados com NaCl 7,5% por via endovenosa 15 minutos antes da reperfusão, com posterior ressecção dos lobos não-isquemiados; grupo Isquemia com Hipotermia + Solução Salina Hipertônica a 7,5% (FHTS): animais serão submetidos a 40 min de isquemia com hipotermia a10ÚC e tratados com NaCl 7,5% por via endovenosa 15 minutos antes da reperfusão com posterior ressecção dos lobos não isquemiados. Serão avaliados os parâmetros hemodinâmicos (pressão arterial sistêmica, frequência cardíaca e fluxo portal) nos seguintes tempos: basal (T0), 5 min (T1) e 20 min (T2) após início da isquemia, 5 min antes da reperfusão (T3), e 5 min (T4), 30 min (T5), 1h (T6) e 4h (T7) após a reperfusão do fígado. Os animais sofrerão eutanásia 4 horas após a reperfusão para coleta de sangue e tecido. Serão avaliados os níveis de transaminases AST e ALT como índice de lesão tecidual, dos mediadores inflamatórios TNF5Â, IL-6 e IL-10, e o estresse oxidativo (MDA). Fragmentos de fígado serão enviados para análise histológica. (AU)

Avaliação do potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico da melitina em cultura de células humanas

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Biociências (IB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Rio Claro. Rio Claro, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Maria Aparecida Marin Morales
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Mutagênese
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:13/00351-8
Vigência: 01 de março de 2013 - 30 de maio de 2015
Assunto(s):Estresse oxidativo
Resumo
Atualmente acredita-se que produtos naturais possuem vantagens para a saúde, quando comparado aos químicos sintéticos. Um exemplo disso, é o veneno de abelha que sempre foi muito utilizado na medicina oriental tradicional, para tratamento de artrite e de dores em geral. Recentemente, o veneno de abelha tem sido utilizado na indústria de cosméticos como potencial redutor de rugas, sendo a melitina, principal constituinte do veneno de abelha, o princípio ativo mais considerado. A melitina age de forma a aumentar a circulação sanguínea e, consequentemente, a produção de colágeno e elastina, eliminando as células mortas e reduzindo as rugas. Hoje, sabe-se que ela também age sobre células saudáveis, causando rompimento celular, uma vez que se liga à mambrana plasmática, formando poros hidrofílicos ou aumentando permeabilidade desta estrutura. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo avaliar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico da melitina em células de fibroblastos (HFF-1). Para isso, serão utilizados os testes do MTT e do micronúcleo com bloqueio da citocinese, além do ensaio do cometa e testes de estresse oxidativo. Os resultados obtidos irão permitir que se estime os possíveis efeitos desse componente do veneno de abelha em células humanas, além de nos fornecer um maior conhecimento sobre seu modo de ação no material genético humano. (AU)

Influência da suplementação de zinco na remodelação cardíaca após o infarto agudo do miocárdio

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Leonardo Antonio Mamede Zornoff
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/14500-2
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de julho de 2015
Assunto(s):CardiologiaInsuficiência cardíacaInfarto do miocárdioRemodelação ventricularZinco
Resumo
A insuficiência cardíaca é responsável por grande número de internações em todo mundo. As principais causas dessa doença são a isquemia miocárdica e a hipertensão arterial sistêmica. Dentre as alterações isquêmicas, podemos destacar o infarto agudo do miocárdio (IAM). Após o IAM podem ocorrer alterações complexas na arquitetura ventricular, envolvendo tanto a região infartada quanto a não infartada. Nos últimos anos, estas adaptações passaram a ser estudadas com o nome de remodelação ventricular ou cardíaca. Devido ao grande impacto sócio-econômico e às altas taxas de mortalidade, torna-se relevante a identificação de fatores que modulem o processo de remodelação ventricular, como o zinco. O zinco é metal divalente, essencial para a atividade de diversas enzimas como a enzima conversora da angiotensina, a superóxido dismutase e as metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs). Além disso, esse metal tem papel fundamental na estrutura das membranas celulares, e na estabilização das estruturas de RNA, DNA e ribossomos. Atualmente, evidências experimentais e clínicas mostram que a concentração sérica de zinco encontra-se diminuída na insuficiência cardíaca. Essa redução pode interferir com a atividade das metaloproteinases, com estresse oxidativo e, consequentemente, com o processo inflamatório. No entanto, a influência da suplementação de zinco na remodelação cardíaca após o infarto agudo do miocárdio ainda não foi estudada. (AU)

Bioacessibilidade in vitro de carotenóides e de compostos fenólicos em emulsões: compostos formados e influência na capacidade antioxidante

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Engenharia de Alimentos (FEA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Adriana Zerlotti Mercadante
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/20988-8
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de julho de 2015
Assunto(s):Química de alimentosCompostos fenólicosCarotenoidesAntioxidantesFrutas
Resumo
Os carotenoides e os compostos fenólicos apresentam propriedades físico-químicas que são importantes para a diminuição do risco de desenvolvimento de diversas doenças crônico-degenerativas. Esta ação está parcialmente relacionada com a redução ou inibição de reações deletérias de oxidação, através da desativação de espécies reativas de oxigênio (ROS) e de nitrogênio (RNS) produzidas em excesso pelo organismo durante o estresse oxidativo e/ou nitrosativo. A identificação dos compostos formados após a digestão e as alterações que ocorrem na capacidade antioxidante frente a espécies reativas de relevância biológica foram investigadas apenas em poucos dos estudos sobre a bioacessibilidade de carotenoides e de compostos fenólicos em alimentos. Porém, este tipo de informação é essencial uma vez que provavelmente os teores de compostos bioativos presentes no alimento, bem como sua capacidade antioxidante, devem estar superestimados quando comparados à fração bioacessível. Desta forma, o projeto tem como objetivo responder as seguintes perguntas: (i) A digestão in vitro tem impacto negativo ou positivo na capacidade de carotenoides e de compostos fenólicos desativarem ROS e RNS?; (ii) Quais são os compostos que estarão bioacessíveis e que atuarão potencialmente como antioxidantes após a digestão in vitro?; (iii) Qual é o efeito da presença concomitante de carotenoides e compostos fenólicos na bioacessibilidade in vitro e na capacidade antioxidante? Para responder estas questões, serão elaboradas emulsões contendo extratos lipofílicos e hidrofílicos de frutas ou de padrões de carotenoides e de compostos fenólicos, a digestão in vitro será avaliada por um método estático, a capacidade de desativar algumas ROS e RNS será avaliada utilizando métodos específicos para cada espécie reativa e os compostos formados em decorrência da digestão serão caracterizados por cromatografia líquida de alta eficiência conectada aos detectores de arranjo de diodos e de massas (HPLC-DAD-MSn). (AU)

Relation among oxidative stress, epigenetic alterations and malignant transformation

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Miriam Galvonas Jasiulionis
Pesquisador responsável no exterior: Regine Schneider-Stock
Instituição no exterior: Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg (FAU). (Alemanha)
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/51300-1
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2015
Convênio/Acordo de cooperação com a FAPESP: BAYLAT
Assunto(s):MelanomaEpigênese genéticaSirtuínasEstresse oxidativo
Resumo
As other tumor types, both genetic and epigenetic alterations seem to contribute to melanoma genesis. Consistent evidences have suggested the key role of epigenetic marks in the genesis of pathologies induced by chronic stress. Increased levels of reactive oxygen species (ROS), caused for example by chronic inflammation, aging or UV radiation, might be responsible for abnormal epigenetic marks, which might significantly contribute to melanoma development. In this way, the study of the relationship among sustained stress, aberrant epigenetic marks and melanocyte malignant transformation may help to comprehend the mechanisms involved in melanoma genesis and, also, open new avenues to the development of new therapeutic strategies. Our laboratory established a murine model of melanocyte malignant transformation associated with sustained stress conditions. Progressive morphological and molecular alterations, which lead to the acquisition of malignant phenotype, were observed after submitting non-tumorigenic mefanocytes to sequential cycles of anchorage blockade. In this way, pre-malignant melanocytes corresponding to intermediate phases of malignant transformation (1C, 2C, 3C and 4C), and different melanoma cell lines, both non-metastatic (4C3- and 4C11-) and metastatic (4C3+, 4C11+, Tm1 e Tm5), were obtained from the non-tumorigenic melanocyte lineage melan-a. Data from our group demonstrated that melan-a anchorage blockade results in oxidative stress and that increased levels of superoxide anion are related to global DNA hypermethylation and increased levels of Dnmtl protein observed in this condition. We have been studied molecular mechanisms underlying alterations of epigenetic marks by ROS and the impact of this modulation on melanocyte malignant transformation. In this way, we have interested both in defining the role of the stress-responsive protein sirtuin-1 in the establishment of aberrant epigenetic marks associated with sustained stressful condition (anchorage blockade) and also in elucidating how dnmt1 transcription is affected by increased levels of ROS during melanocyte anchorage impediment. These studies may provide a better comprehension of how aberrant epigenetic marks are established in response to chronic stress conditions associated with pathological states and then contribute to the development of new therapeutic approaches. (AU)

Efeitos do treinamento físico aeróbio, resistido ou combinado em modelos experimentais de disfunções cardiometabólicas associadas à privação dos hormônios ovarianos

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Universidade Nove de Julho (UNINOVE). Campus Memorial. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Kátia De Angelis
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Educação Física
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/20141-5
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2015
Assunto(s):Fisiologia do exercícioFisiologia cardiovascularTreinamento aeróbioPressão sanguíneaMenopausa
Resumo
Após o advento da menopausa observa-se aumento da incidência de hipertensão, resistência à insulina, diabetes tipo 2 e da morbi-mortalidade. Por outro lado, o treinamento físico aeróbio tem sido recomendado como uma importante terapia para a prevenção e o tratamento de disfunções cardiometabólicas, em função dos reconhecidos benefícios dessa abordagem em diferentes populações. Mais recentemente, o treinamento físico resistido tem sido recomendado nas diretrizes de tratamento de doenças cardiovasculares e metabólicas, no entanto, pouco se sabe sobre os benefícios fisiológicos dessa abordagem. Além disto, os mecanismos envolvidos nos eventuais benefícios do treinamento físico dinâmico aeróbio, resistido ou combinado (aeróbio+resistido) foram muito pouco estudados após a privação dos hormônios ovarianos, principalmente em presença de disfunções cardiometabólicas. Desta forma, o objetivo do presente estudo será avaliar e comparar os efeitos do treinamento físico dinâmico aeróbio, resistido ou combinado em ratas ooforectomizadas normotensas diabéticas por estreptozotocina e em ratas ooforectomizadas hipertensas submetidas à sobrecarga de frutose. Serão realizados 4 subprojetos (SP) que objetivam investigar parâmetros de função cardiovascular (pressão arterial, PA, e freqüência cardíaca, FC), de regulação autonômica cardiovascular (variabilidade da FC e da PA e sensibilidade dos pressorreceptores), metabólicos (peso corporal e do tecido adiposo, glicemia e triglicerídeos sangüíneos, tolerância à insulina) e de capacidade física (teste máximo de corrida em esteira e teste de carga máxima em escada) e sua relação com alterações em parâmetros de estresse oxidativo (lipoperoxidação por quimiluninescência, balanço redox pela razão glutationa oxidada/reduzida, proteínas carboniladas, produção do ânion superóxido e de peróxido de hidrogênio, catalase, glutationa peroxidase, superóxido dismutase, capacidadade antioxidante total), de metabolização de óxido nítrico (concentração de nitritos e nitratos plasmáticos) e de inflamação (leptina, adiponectina, TNF alfa, IL-6 e IL-10). No SP1 serão avaliadas ratas Wistar: euglicêmicas (CS), diabéticas por STZ (DS), ooforectomizadas euglicêmicas (OS) e ooforectomizadas diabéticas por STZ (ODS). No SP2 serão utilizadas ratas Wistar ooforectomizadas diabéticas por STZ: sedentárias (ODS) ou submetidas a treinamento físico aeróbio em esteira (ODA), submetidas a treinamento físico resistido em escada (ODR) ou submetidas a treinamento físico combinado em escada e esteira em dias alternados (ODC). No SP3 serão avaliadas ratas Wistar controles (CS), além de ratas espontaneamente hipertensas (SHR): submetidas (OHS) ou não (HS) à privação dos hormônios ovarianos e ooforectomizadas submetidas à sobrecarga crônica de frutose (OHFS). No SP4 serão utilizadas SHR fêmeas divididas em ooforectomizadas tratadas cronicamente com frutose: sedentárias (OHFS) ou submetidas ao treinamento físico aeróbio (OHFA), resistido (OHFR) ou combinado (OHFC). Os resultados do presente estudo poderão contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos envolvidos na associação de fatores de risco no sexo feminino, bem como dos efeitos do treinamento físico aeróbio, resistido ou combinado em modelos que associam privação dos hormônios ovarianos e disfunções no controle glicêmico em presença de normotensão (diabetes por STZ) ou hipertensão (SHR tratados com frutose). (AU)

Respostas moleculares frente à natação contínua e intervalada e à melatonina exógena em ratos: sinalizadores celulares do metabolismo intermediário e de vias inflamatórias e de estresse oxidativo

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Ciências Aplicadas (FCA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Limeira, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Claudio Alexandre Gobatto
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Educação Física
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/20501-1
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2015
Assunto(s):Fisiologia do esforçoNataçãoMelatoninaLactatosExpressão gênicaResposta imuneEstresse oxidativo
Resumo
O modelo animal com a utilização de ratos albinos vem sendo largamente utilizado no meio científico para o avanço de conhecimentos específicos em diversas áreas. Em duas décadas de estudos, nosso grupo desenvolveu tecnologia para determinar a intensidade de exercício em natação por meio da padronização de diversos protocolos de testes para a avaliação das capacidades aeróbia e anaeróbia em ratos e camundongos e, mais recentemente, produziu equipamentos de medida da força de propulsão do nato (sistema atado) e de pesagem hidrostática, relativizando a intensidade de esforço a partir da densidade corporal. Isso permitiu a profunda investigação dos efeitos do treinamento sistematizado e periodizado de natação em ratos. Apesar disso, investigações acerca da participação de proteínas envolvidas no metabolismo do lactato em exercício contínuo e intermitente necessitam elucidação, assim como das respostas inflamatórias e de estresse oxidativo. Outro cuidado é preservar, nesses modelos experimentais, as características biológicas do rato, garantindo a esses animais o período noturno como de vigília, em desenhos investigativos que possam fornecer condições cronobiológicas e de iluminação ambiental adequadas. Assim, em linhas gerais, o estudo abordará: 1) os efeitos do exercício contínuo e intervalado sobre a expressão gênica e conteúdo protéico dos MCTs 1 e 4, PGC-1alpha e HIF-1alpha nas fibras esqueléticas I e II; 2) as respostas da administração da melatonina associada ao exercício contínuo de natação (em máxima capacidade aeróbia) sobre a atividade da via IKK/NF-kB, em situações absolutamente controladas do ponto de vista circadiano e de intensidade de esforço, o que permitirá melhor entendimento das interações entre essas variáveis com o sistema imunológico e o estresse oxidativo. Nossa hipótese é que os diferentes regimes de exercício (contínuo vs intervalado) exerça influência sobre as respostas moleculares do metabolismo intermediário e que a melatonina exógena reduza o estresse e forneça melhores respostas imunológicas em nossas condições experimentais. (AU)

A importância do sono e do sildenafil na progressão da insuficiência renal crônica: uma nova abordagem terapêutica

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Monica Levy Andersen
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Geral
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/21794-2
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2015
Assunto(s):Insuficiência renal crônicaProgressão da doençaComportamento sexualDisfunção sexual fisiológicaPrivação de sonoEstresse oxidativoÓxido nítricoCitrato de sildenafila
Resumo
A insuficiência renal crônica (IRC) é uma doença de elevada morbidade e mortalidade, cuja incidência e prevalência têm aumentado em proporções epidêmicas no Brasil e em todo o mundo. O paciente com IRC, em programa de hemodiálise, é conduzido a conviver diariamente com uma enfermidade incurável que o obriga a um tratamento longo e doloroso com alterações de grande impacto que comprometem sua qualidade de vida. Juntamente com a evolução da doença e suas complicações, destaca-se o desenvolvimento da disfunção sexual e hipertensão, comorbidades altamente prevalentes e associadas ao estresse oxidativo e à menor disponibilidade de óxido nítrico (ON). Devido também à constante exposição a situações estressoras, a restrição de sono constitui outro fator inerente ao cotidiano do paciente com IRC. Sabe-se, porém, que o sono exerce funções essenciais na restauração e manutenção da homeostasia corporal. Portanto, o presente estudo pretende investigar as consequências de um tratamento crônico com baixas doses de sildenafil, cujo mecanismo de ação é estimular a via de produção do ON, diante dos possíveis efeitos negativos potencializados pela restrição de sono em um modelo animal de IRC. Para isso, serão utilizados ratos machos adultos distribuídos em 4 grupos: controle tratado com veículo ou sildenafil e nefrectomizado tratado com veículo ou sildenafil, os quais serão redistribuídos após 46 dias em: restritos de sono ou gaiola-moradia. Será realizada a avaliação do comportamento sexual, da pressão arterial, perfil bioquímico e inflamatório, bem como análises hormonais. Possíveis mecanismos moleculares relacionados com estresse oxidativo e à produção de ON serão também investigados por meio de expressão gênica. (AU)

Angiotensina-(1-7) como um peptídeo citoprotetor em ilhotas pancreáticas e seu potencial terapêutico no diabetes mellitus

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Dulce Elena Casarini
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Processo:12/19392-3
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2016
Assunto(s):NefrologiaDiabetes mellitusCitoproteçãoIlhotas de LangerhansSistema renina-angiotensina
Resumo
O Diabetes Mellitus (DM) é uma doença crônica caracterizada pela deficiência da produção da insulina (DM1) ou pela resistência dos tecidos periféricos a este hormônio (DM2). Sabe-se que, especialmente no DM2, o sistema renina-angiotensina (SRA) desempenha um papel importante no estabelecimento da síndrome metabólica associada. O SRA possui uma função dual. A primeira é representada pela angiotensina II (Ang II) e é classicamente caracterizada por vasoconstrição, inflamação, reabsorção de sal e água nos rins e estresse oxidativo. Já a segunda resulta em efeitos antagônicos, associados à atuação da angiotensina 1-7 (Ang-(1-7)). A modulação do SRA se mostrou uma estratégia de tratamento válida em casos de hipertensão, hiperglicemia, resistência à insulina e dislipidemias. Os efeitos da Ang II, no pâncreas, levam à disfunção da secreção dual de insulina, à redução do fluxo sanguíneo, ao aumento do estresse oxidativo e ao estímulo da produção de citocinas inflamatórias, causando a destruição das células-b. Em contrapartida, o estímulo da principal enzima produtora de Ang-(1-7) (ECA2) já demonstrou diversos efeitos citoprotetores locais, como a indução da produção de insulina, o reestabelecimento da secreção apropriada deste hormônio, a diminuição da apoptose celular e, ainda, a proliferação de células-b. Com base nestes resultados, este projeto visa caracterizar o papel citoprotetor da Ang-(1-7) em ilhotas pancreáticas sob estresse. Para tal, propõe-se o tratamento com Ang-(1-7) in vivo, em modelo experimental murino de DM2 induzido por alta ingestão de frutose, assim como in vitro, em ilhotas isoladas de ratos não-diabéticos, já que o próprio isolamento celular, essencial para o procedimento de transplante de ilhotas, está relacionado à disfunção destas células. (AU)

Estudo dos marcadores de hipóxia e de estresse oxidativo em diferentes momentos da vida de ratas diabéticas

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Débora Cristina Damasceno
Local de pesquisa: University of Texas Health Science Center at Houston (UTHealth) (Estados Unidos)
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
Processo:12/16084-6
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de março de 2013
Assunto(s):Estresse OxidativoPrenhezRatos
Resumo
Há evidências que a hiperglicemia aumenta a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO). A principal fonte intracelular de ERO é a mitocôndria e alterações associadas ao fenótipo mitocondrial no diabete são muito estudadas. Para promover a biogênese mitocondrial e a respiração, a proteína coativadora 1-alfa (±) do receptor ativado pelo proliferador do peroxissoma [Peroxisome proliferator activated receptor-coactivator (PGC)-1alpha)] tem papel relevante. Esta proteína está amplamente distribuída nos tecidos e desempenha papel fundamental na regulação do desenvolvimento celular e homeostase de oxigênio (O2). Tem sido demonstrado que a biogênese mitocondrial induzida por PGC-1± aumenta o consumo de O2, diminuindo a disponibilidade de oxigênio intracelular para as enzimas HIF-hidroxilases, que estabiliza o HIF-1alpha. Os fatores induzíveis por hipóxia (HIF) estão entre as proteínas de transcrição mais bem definidas e identificadas por serem reguladas pelo estado redox intracelular. HIF-1alpha é o principal regulador da homeostase de O2. Em baixas concentrações de O2, há ativação de outros fatores para aumentar a liberação de O2 às células, facilitando a produção de ATP. Assim, nosso grupo de pesquisa visa analisar marcadores de hipóxia e de estresse oxidativo no fígado de animais com diferentes idades apresentando diabete de intensidade moderada, induzido por droga beta-citotóxica (streptozotocin), visando também aprimorar os conhecimentos sobre os mecanismosresponsáveis pelas alterações decorrentes do diabete e/ou hipóxia. Este projeto está sendo realizado no Brasil e parte do aprendizado metodológico será nos EUA, visto que o supervisor do exterior é possui reconhecida competência internacional na área de pesquisa. Além disso, salientamos que estágio da solicitante no exterior trará substancial contribuição para a própria bolsista, orientador, Programa de Pós-graduação, outros docentes e estudantes envolvidos no referido projeto de pesquisa. (AU)

Status antioxidante e estresse oxidativo sérico em ratos com lesão periapical isolada ou associada à diabetes

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Odontologia (FOA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Luciano Tavares Angelo Cintra
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:12/04588-0
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de julho de 2014
Assunto(s):Diabetes mellitusEstresse oxidativo
Resumo
O objetivo deste trabalho será avaliar a influência da lesão periapical isolada ou associada à diabetes na determinação da capacidade antioxidante total, albumina, bilirrubina e ácido úrico e o estresse oxidativo sérico em ratos Wistar. Serão utilizados 40 ratos divididos em 4 grupos de 10 animais: G1- ratos saudáveis; G2 - ratos com doença pulpar; G3 - ratos diabéticos; G4 - ratos diabéticos com doença pulpar. A diabetes será induzida por meio da aplicação de estreptozotocina via endovenosa e confirmada nas 24/48 horas subsequentes pela avaliação glicêmica. A lesão periapical será induzida pela exposição do tecido pulpar do primeiro molar superior direito ao meio oral. Após 30 dias os animais terão o sangue coletado e serão sacrificados. Com o tecido sanguíneo serão realizadas as provas bioquímicas para a capacidade antioxidante total, quantificação dos antioxidantes endógenos (albumina, bilirrubina e ácido úrico) e verificação do stress oxidativo sérico, pela determinação do malonaldeído (MDA). As hemimaxilas contendo os dentes portadores de lesão periapical serão removidas e separadas. As peças serão processadas laboratorialmente e avaliadas em microscopia óptica para caracterizar o perfil da doença local em cada animal. Os cortes teciduais serão corados em H.E. e avaliados por critérios pré-estabelecidos atribuindo-se escores aos eventos microscópicos. Os resultados obtidos nas análises hematológica e histológica serão analisados e comparados do ponto de vista estatístico com nível de significância de 5% (p < 0,05). (AU)

Perfil cognitivo de fumantes: relações com parâmetros respiratórios e de estresse oxidativo

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Sabine Pompéia
Área do conhecimento:Ciências Humanas - Psicologia - Psicologia Fisiológica
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Processo:12/20664-8
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de outubro de 2015
Assunto(s):Estresse oxidativoPsicobiologiaFunção executivaHábito de fumarCogniçãoEscolaridade
Resumo
O tabagismo é a principal causa de morte evitável no mundo. Estima-se que mais de 80% dos fumantes sejam provenientes de países em desenvolvimento sendo a frequência de tabagismo inversamente proporcional aos anos de escolaridade. O tabagismo afeta o sistema nervoso central de diversas formas, dentre as quais se destacam diminuição do aporte de oxigênio ao cérebro e alteração do metabolismo de gasotransmissores como óxido nítrico e monóxido de carbono. Contudo, a relação desses efeitos com o prejuízo cognitivo do tabagismo é pouco conhecida. O presente projeto pretende melhor caracterizar o prejuízo cognitivo de fumantes e determinar como este prejuízo se relaciona com parâmetros respiratórios/estresse oxidativo em adultos jovens com alta e baixa estimulação cognitiva (escolaridade e poder aquisitivo), uma vez que este fator afeta ambos o hábito de fumar e a cognição. O estudo será do tipo transversal e envolverá 80 voluntários saudáveis divididos em 4 grupos de 20 sujeitos (fumantes e não fumantes de alta e baixa estimulação cognitiva). Eles serão submetidos a uma bateria de testes que visa avaliar os domínios cognitivos mais afetados pelo tabagismo (funções executivas, conjunto de domínios baseado nas teorias mais recentes; atenção sustentada; memória episódica). Serão também colhidas informações sobre parâmetros respiratórios por exalado pulmonar, e medidas de esforço cognitivo (mensuração do diâmetro pupilar por filmagem da região dos olhos; assim, não haverá nenhuma medida invasiva. O presente estudo tem o potencial de determinar fatores que predispõem tabagistas ao desenvolvimento de problemas cognitivos e uma possível técnica de redução de danos nesta população. (AU)

"análises histopatológicas e moleculares dos efeitos da imunoterapia intravesical com Bacilo Calmette-Guerin (BCG) em associação com o treinamento físico aeróbio na progressão do câncer de bexiga urinária de ratos"

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:José Carlos Souza Trindade Filho
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Cirurgia
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/20997-7
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2014
Assunto(s):UrologiaExercício físicoEstresse oxidativoAngiogênese
Resumo
O baixo grau de eficácia das terapias contra o câncer de bexiga urinária (CB) pode estar relacionado aos baixos efeitos dessas terapias sobre os mecanismos de reparo tecidual, angiogênese e enzimas antioxidantes. O tratamento do CB com Bacilo Calmette-Guerin (BCG) tem efeito comprovado na redução de recidiva e progressão tumoral, embora ocorram efeitos colaterais de intensidades variadas, desde sintomas irritativos leves até reação sistêmica grave. Evidências sugerem que os fatores ambientais, estilo de vida e principalmente o exercício físico podem reduzir a incidência de câncer, podendo retardar o crescimento tumoral em até 50%. Em face do papel estratégico de novas modalidades terapêuticas e da necessidade de estudos específicos na área da carcinogênese urotelial, destaca-se o exercício físico aeróbio, o qual abre nova perspectiva no tratamento de alguns cânceres, incluindo o urotelial. Assim, os objetivos principais deste estudo serão caracterizar e comparar os efeitos histopatológicos e moleculares da imunoterapia intravesical com BCG associada ao exercício físico aeróbio no tratamento do CB induzido em ratos, bem como estabelecer os efeitos dessas estratégias terapêuticas envolvendo fatores indutores e reparadores de lesão celular, angiogênese e enzimas antioxidantes. Um total de 60 ratas da linhagem Fisher 344 serão utilizadas.Para a indução do CB, 40 animais serão anestesiados e induzidos quimicamente com uma dose intravesical de 1,5 mg/kg de N-metil-N-nitrosouréia (MNU) a cada 15 dias, totalizando 4 doses. Os outros 20 animais que não receberão MNU serão considerados como Grupo Controle (Grupo 1) e Grupo Controle-Exercício Físico (Grupo 2). Duas semanas após a última dose de MNU, os animais serão divididos em 6 grupos: Grupo Controle (Grupo 1): receberá uma dose intravesical de 0,3 mL de solução fisiológica 0,9% por 8 semanas consecutivas; Grupo Controle-Exercício Físico (Grupo 2): será submetido ao protocolo de exercício físico aeróbio (natação) por 8 semanas consecutivas; Grupo MNU (Câncer, Grupo 3): receberá o mesmo tratamento que o Grupo 1; Grupo MNU-BCG (Grupo 4): receberá uma dose intravesical de 106 UFC - 40 mg de BCG diluída em 0,3 mL de solução fisiológica 0,9% por 8 semanas consecutivas; Grupo MNU-Exercício Físico (Grupo 5): receberá o mesmo tratamento que o Grupo 2; Grupo MNU-Exercício Físico-BCG (Grupo 6): receberá uma dose intravesical de 106 UFC - 40 mg de BCG e simultaneamente submetido ao protocolo de exercício físico aeróbio (natação), ambos por 8 semanas consecutivas. Após 18 semanas de experimento, as bexigas urinárias serão coletadas e submetidas às análises histopatológicas e imunohistoquímicas. (AU)

Envolvimento mitocondrial na sobrevivência do Trypanosoma cruzi tratado com concentrações de H2O2 que induzam ao dano no DNA

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Fernanda Ramos Gadelha
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/21594-3
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de julho de 2014
Assunto(s):Reparação de DNAMitocôndriasTrypanosoma cruzi
Resumo
O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, uma doença debilitante que afeta de 8 a 10 milhões de pessoas na América Latina tendo um considerável impacto econômico e social. Os epimastigotas de T. cruzi têm que lidar com as espécies reativas de oxigênio (EROs) no trato intestinal do hospedeiro invertebrado, que são derivadas da degradação de hemoglobina que gera altos níveis de heme. O excesso de EROs pode ter efeitos deletérios na célula, uma vez que podem oxidar lipídios, carboidratos, proteínas e ácidos nucléicos. No DNA, a ação das EROs pode causar quebra nas fitas simples e dupla (SSBs e DSBs respectivamente), excisão de base e oxidação. Como a maioria dos organismos vivos, o T. cruzi é suscetível ao estresse oxidativo, por isso, o reparo do DNA é essencial para a sua sobrevivência e estabelecimento da infecção. O T. cruzi possui somente uma mitocôndria e hoje em dia está claro que ela tem um importante papel além da produção de ATP. Esta organela é fonte de moléculas de sinalização e sua integridade é essencial para a sobrevivência do parasita. Sendo assim, este projeto abordará a extensão pela qual a mitocôndria contribui para a sobrevivência do parasita (diferentes cepas) sob tratamento com H2O2. Estes resultados levarão a uma melhor compreensão das estratégias utilizadas pelo T. cruzi para a sua sobrevivência sob condições de estresse oxidativo e permitirá a identificação de novos alvos que poderão levar ao desenvolvimento de uma terapia mais específica. (AU)

Envolvimento do gene kiaa0090 nas respostas upr-erad, apoptose e autofagia, e reflexos do seu silenciamento sobre o proteoma de células de melanoma e melanócitos

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Enilza Maria Espreafico
Local de pesquisa: Ludwig Institute for Cancer Research, Oxford (Inglaterra)
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
Processo:12/17890-6
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de dezembro de 2013
Assunto(s):ProteomaMelanoma
Resumo
O retículo endoplasmático (ER) possui dois mecanismos integrados de controle de qualidade de proteínas que estão em trânsito pela via: resposta a proteínas mal enoveladas (UPR) e degradação de proteínas associada ao retículo endoplasmático (ERAD). Christianson e colaboradores (2011) descreveram a participação do gene KIAA0090 de humanos na formação do mesmo complexo na membrana do retículo endoplasmático (EMC), descrito anteriormente em S. cerevisae, o qual foi nomeado mammalian EMC (mEMC). Em tumores de crescimento rápido, hipóxia e estresses oxidativos podem induzir a UPR/ERAD e estas respostas pode gerar um efeito protetor para a célula tumoral, impedindo que sejam direcionadas à apoptose. Drogas que inibam moléculas-chave da via de sinalização UPR podem impedir a adaptação destas células a esse microambiente tumoral alterado, sendo portanto uma nova classe de agentes antitumorais que devem ser melhor explorada (Koong et al., 2006; Lee et al., 2003)Nos dados apresentado no relatório científico que está sendo submetido, mostramos que o silenciamento do gene Kiaa0090 em células de melanoma murino B16-F10 diminui a capacidade proliferativa destas células, e também a capacidade de gerar tumores em modelos animais. Ainda observamos um alteração no fenótipo celular, com a geração de células capazes de proliferarem em condições de não adesão, indicando alguma alteração em vias de sinalização que possam estar envolvidas em adesão, migração, invasão e morte celular.Para ganhar indícios na influência do gene Kiaa0090 nestas funções celulares e as vias de sinalização envolvidas nelas, e para tentar explicar os fenótipos encontrados, pretendemos analisar o proteoma global, da superfície celular e fração secretada (superficioma e secretoma), e também / mitocondrial, de células de melanoma e de melanócitos silenciadas ou não para a proteína KIAA0090. Avaliaremos também o efeito do silenciamento do gene Kiaa0090 nas respostas UPR/ERAD e a ligação com os processos de apoptose e autofagia.O estágio no exterior será realizado sob a supervisão de John Christianson, primeiro autor do trabalho que descreveu a participação da Kiaa0090 na formação do complexo mEMC. O estágio em pesquisa será realizado no Instituto Ludwig de pesquisa para o Câncer, ligado à Universidade de Oxford, na Inglaterra (AU)

Respostas bioquímicas e genotóxicas em peixes Astyanax SP expostos à efluentes de esgoto tratado e não tratado da estação de tratamento de esgoto de São José do Rio Preto

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Eduardo Alves de Almeida
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/22691-2
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de dezembro de 2013
Assunto(s):BiomarcadoresEcotoxicologia
Resumo
O despejo de efluentes domésticos e industriais são as principais fontes de contaminação do ambiente aquático, assim como a lixiviação dos solos utilizados na agricultura em que são utilizados pesticidas e fertilizantes. Os contaminantes provenientes destes locais são liberados em rios, lagos e oceanos, podendo gerar efeitos nocivos aos animais aquáticos tais como alterações fisiológicas, doenças genéticas e até a morte. O tratamento nas Estações de Tratamento de Esgoto (ETE) não remove os contaminantes orgânicos que estão em concentração traço. O objetivo do trabalho é verificar se há diferenças genotóxicas e bioquímicas em peixes lambari da espécie Astyanax sp, expostos a águas retiradas de diferentes pontos localizados nas proximidades da ETE de São José do Rio Preto. Em uma exposição de 7 dias. O teste de genotoxicidade será realizado com ensaio de cometa retirando o sangue dos animais. Como biomarcadores de contaminação em brânquia e fígado será avaliado as enzimas Glutationa S-transferase (GST), 7-Etoxiresorufina-¸-deetilase EROD e níveis de peroxidação lipídica (MDA) que atuam no combate ao estresse oxidativo gerado após a exposição a contaminantes, desta forma poderemos verificar a eficiência do tratamento de efluente frente aos poluentes químicos. (AU)

Efeitos do estresse crônico variado no músculo pterigóideo medial contralateral em ratos com e sem alteração oclusal

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Mamie Mizusaki Iyomasa
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Anatomia
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/23003-2
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2015
Assunto(s):MaloclusãoEstresseBiologia oralHistoquímicaEros
Resumo
A disfunção temporomandibular (DTM) tem alta prevalência em nossa sociedade, sendo caracterizada por uma condição severa de dor dos músculos da mastigação e ou articulação temporomandibular. Apesar da indicação de múltiplos fatores iniciadores contribuindo para a DTM, dentre eles o estresse emocional, ainda há controvérsia quanto a sua etiologia e, é pouco compreendida a sua fisiopatologia. Usando o rato como modelo experimental animal, este estudo tem o propósito de investigar o efeito do estresse crônico variado associado à exodontia unilateral, sobre o músculo pterigóideo medial contralateral. Nossa hipótese é que o estresse crônico variado associado à maloclusão induzirá modificações plásticas, provocando modificações na morfologia, no metabolismo oxidativo e estresse oxidativo das fibras musculares. Assim, o objetivo deste trabalho será avaliar o músculo pterigóideo medial contralateral. Serão utilizados 32 ratos machos Wistar, adultos jovens, pesando em média 200g, divididos aleatoriamente em dois grandes grupos: Grupos Maloclusão (GM): ratos expostos a exodontia unilateral esquerda (n=16); e Grupo Sem Maloclusão (GS): ratos sem exodontia (n=16). Em cada grupo haverá os seguintes subgrupos (n=8) em cada: I - sem estresse; II: estresse crônico variado. Os animais do grupo maloclusão (GM) serão submetidos à exodontia unilateral dos molares superiores esquerdo, sob a anestesia intraperitoneal, com Xilazina 4% (10mg/kg) e Cetamina 10% (80mg/kg), no dia zero. Em ambos os grupos: GM e GS, os ratos dos subgrupos II serão submetidos a protocolos diferentes de estresse, a partir do 14º dia após a exodontia. Os protocolos serão diferentes a cada dia por cinco dias consecutivos, os quais serão repetidos a partir do 6º dia por mais cinco dias. Os ratos serão submetidos à eutanásia no 24º dia após início do experimento, para obtenção do músculo pterigóideo medial contralateral, e posterior análises morfológicas e histoquímicas. (AU)

O uso de click chemistry como ferramenta de estudo para identificação de proteínas modificadas por aldeídos de colesterol

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Sayuri Miyamoto
Local de pesquisa: Vanderbilt University (VU) (Estados Unidos)
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
Processo:12/16145-5
Vigência: 15 de janeiro de 2013 - 14 de janeiro de 2014
Assunto(s):Espectrometria de massasAldeídosRadicais livres
Resumo
O colesterol é um lipídeo neutro amplamente encontrado nas membranas celulares, onde influencia na fluidez, organização e nos eventos de sinalização celular. Por desempenhar um papel estrutural e regulador na membrana, a sua concentração no organismo sofre um rígido processo de controle. O aumento de colesterol na mitocôndria, por exemplo, leva a uma depleção nos níveis de glutationa mitocondrial, acarretando em uma menor capacidade de detoxificação pela organela, um aumento no estresse oxidativo e, por conseguinte, uma maior oxidação do colesterol. A oxidação do colesterol pode levar à produção de aldeídos reativos. Diversos estudos reportaram níveis elevados destes aldeídos em placas ateroscleróticas e em cérebro de pacientes portadores de doenças neurodegenerativas. Além disso, evidências mostram a capacidade destes aldeídos em se ligar covalentemente a proteínas, levando à sua modificação estrutural e funcional. Entretanto, a extensão da modificação de proteínas por aldeídos de colesterol e suas implicações para a células são pouco conhecidas. Neste sentido, o desenvolvimento de ferramentas com o objetivo de identificar proteínas modificadas por estes aldeídos é de grande interesse, uma vez que pode auxiliar na compreensão de seus papéis na sinalização celular e no desenvolvimento de diversas patologias. Sendo assim, este projeto tem como objetivos estudar modificações de aldeídos de colesterol em proteínas utilizando a abordagem de click chemistry. Para esta finalidade, tem-se como metas sintetizar aldeídos de colesterol modificados, caracterizar suas reações com peptídeos e proteínas e identificar os seus principais alvos celulares. (AU)

Mecanismos de morte celular na cardiotoxicidade induzida pela doxorrubicina

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Ana Lucia dos Anjos Ferreira
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/17280-3
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 31 de agosto de 2015
Assunto(s):Bioquímica da nutriçãoCardiotoxinasDoxorrubicinaEstresse oxidativoApoptoseExpressão gênicaDanos do DNA
Resumo
A cardiotoxicidade induzida pela doxorrubicina (DXR), antraciclina isolada da actinobacteria Streptomyces peucetius, corresponde a um dos eventos patofisiológicos que limitam o potente efeito antineoplásico desse composto. A morte celular resultante das condições de toxicidade normalmente é fruto de um conjunto de mecanismos metabólicos desregulados, como por exemplo, o estresse oxidativo. Além desse, alterações no fluxo de cálcio intracelular e na permeabilidade dos poros de transição mitocondrial parecem ser outros importantes fatores que levam à morte celular. Sabe-se, que um dos produtos da ação dos radicais reativos sobre as membranas, os aldeídos, alteram o estado redox mitocondrial e formam aductos com proteínas, inibindo suas atividades. No entanto, há uma classe específica de enzimas que remove essas substâncias tóxicas da célula, os aldeídos desidrogenases (ALDH2), podendo reduzir seus efeitos deletérios. Assim, o presente estudo propõe investigar em ratos Wistar, os mecanismos da cardiotoxicidade induzida pela DXR e o possível potencial cardioprotetor do gene ALDH2. Para isso, será avaliado: a expressão de genes relacionados a vias de ² oxidação de ácidos graxos poliinsaturados (PCR-array) e dos genes PPI e C1QBP relacionados a vias de toxicidade celular ligadas a canais de cálcio; os níveis de cálcio mitocondrial e citoplasmático; as vias de morte celular induzidas pela DXR (apoptose e necrose) e a expressão dos genes BAX e BCL2; a atividade do gene ALDH2 e da respectiva enzima; os microRNAs relacionados à regulação do gene ALDH2 e dos associados às vias de morte, in silico e por qRT-PCR. Espera-se que o conjunto de resultados possa contribuir para a elucidação do potencial cardiotóxico da DXR e, consequentemente, para que possam ser estabelecidas estratégias eficazes para a redução dos efeitos secundários da DXR sobre o coração. (AU)

Avaliação in vitro do p-cresol sobre o metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos de cães

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Paulo César Ciarlini
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Clínica e Cirurgia Animal
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:11/16018-0
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 28 de fevereiro de 2014
Assunto(s):Insuficiência renalPatologia clínicaEstresse oxidativo
Resumo
Em humanos a imunossupressão que ocorre em pacientes urêmicos está associada com a disfunção dos neutrófilos causada pelas toxinas urêmicas. O efeito da toxina urêmica p-cresol sobre a função dos neutrófilos humanos têm sido amplamente investigado. Esta toxina não é devidamente filtrada durante a hemodiálise e seu acumulo no sangue promove a inibição do metabolismo oxidativo dos neutrófilos, afetando dessa maneira a sua função bactericida. A disfunção neutrofílica em cães nefropatas ainda não foi adequadamente investigada. Recentemente nosso grupo obteve evidência in vitro de que o metabolismo oxidativo dos neutrófilos de cães sadios é afetado quando incubado como soro urêmico, porém até o momento não há estudos sobre o efeito específico do p-cresol sobre a função neutrofílica nesta espécie. Neste sentido, o presente trabalho objetiva mensurar as concentrações plasmáticas de p-cresol em cães hígidos e com IRC e testar a hipótese de que à semelhança ao que ocorre em humanos o aumento desta toxinaa está associado com alterações do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. Para tal será padronizada a metodologia para quantificar por cromatografia de fase líquida a concentração plasmática desta toxina em cães controles hígidos e portadores de IRC equivalente ao estágio IV. Também será avaliado e comparado in vitro o efeito específico do p-cresol sobre a produção de superóxido, a peroxidação lipídica e a taxa de apoptose de neutrófilos isolados de cães controles hígidos, considerando-se as concentrações plasmáticas observadas "in vivo" em cães com IRC. Células isoladas de 20 cães saudáveis serão incubadas em meio de RPMI, com e sem p-cresol, e plasma de cães com IRC. O metabolismo oxidativo dos neutrófilos será avaliado por citometria de fluxo capilar utilizando a sonda hidroetidina. A apoptose e a viabilidade dos neutrófilos será quantificada em citômetro de fluxo capilar utilizando sistema Anexina V-PE. O estresse oxidativo será avaliado pela quantificação plasmática das espécies reativas ao tiobarbitúrico, do status antioxidante total, ácido úrico, albumina e bilirrubina total. (AU)

Avaliação do efeito de antioxidantes no meio de maturação in vitro suplementado com fluido folicular de mulheres inférteis com endometriose sobre a qualidade oocitária e embrionária, utilizando modelo experimental bovino

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Paula Andrea de Albuquerque Salles Navarro
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:12/15070-1
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 31 de julho de 2014
Assunto(s):AntioxidantesInfertilidade femininaEndometriose
Resumo
A endometriose é uma doença de elevada prevalência em mulheres na menacme e apresenta forte associação com infertilidade. Os mecanismos etiopatogênicos responsáveis tanto pela redução da fertilidade natural, como pelos piores resultados dos procedimentos de reprodução assistida em portadoras desta doença permanecem pouco elucidados, sendo questionado um possível papel deletério da endometriose sobre qualidade oocitária, possivelmente mediado pelo estresse oxidativo (EO). Recentemente, em nosso laboratório, foi demonstrado que o fluido folicular (FF) de pacientes com endometriose leve causa anomalias meióticas oocitárias quando adicionado ao meio de maturação in vitro (MIV) em bovinos. Todavia, os mecanismos pelos quais o FF de portadoras de endometriose promove anomalias meióticas oocitárias permanecem desconhecidos, motivando a realização do presente estudo, com o objetivo de avaliar o efeito da adição dos antioxidantes L-carnitina e N-acetil-cisteína ao meio de MIV suplementado com FF de mulheres inférteis com ou sem endometriose sobre o fuso meiótico oocitário, desenvolvimento embrionário e taxa de apoptose de blastocistos, em modelo bovino. Para análise de anomalias meióticas, após a MIV, os oócitos serão fixados e marcados com fluorescência para a visualização do fuso celular e distribuição cromossômica. Para a análise do impacto do FF sobre a qualidade embrionária, após a fertilização in vitro, será observada a taxa de formação de blastocistos eclodidos e a percentagem de blastômeros apoptóticos nos blastocistos eclodidos pela técnica de TUNEL. Os achados visam agregar informações sobre os mecanismos etiopatogênicos da infertilidade relacionada à doença e abrir perspectivas para novas abordagens terapêuticas. (AU)

Avaliação do estresse oxidativo e inflamação em ratas senescentes com resistência à insulina induzida pela ingestão de frutose

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Elaine Guadelupe Rodrigues
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo:12/19208-8
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 31 de julho de 2014
Assunto(s):EnvelhecimentoEstresse oxidativoResistência à insulinaInflamaçãoNeutrófilos
Resumo
A Teoria do Envelhecimento por Radicais Livres propõe que alterações encontradas nos idosos decorrem de um desbalanço entre danos oxidativos e defesas antioxidantes. Acompanhando o estresse oxidativo, existe um aumento de fatores circulantes, como proteína-C reativa e citocinas pró-inflamatórias, p.ex., IL-1, IL-6, TNF-±. Estes fatores deixam o organismo em um estado de inflamação crônica, com ativação prolongada das células do sistema imune que podem levar à imunossenescência, caracterizada pela alteração da composição de linfócitos nos órgãos linfóides secundários e na periferia, o que torna o indivíduo mais suscetível a infecções e doenças. É comprovado que um estado inflamatório crônico está associado à resistência à insulina, uma característica do diabetes mellitus tipo 2 e também de um estágio anterior a doença, sendo um forte fator para o desenvolvimento da mesma. A população idosa com resistência à insulina e hiperglicemia de jejum, mas ainda não caracterizada como diabética, é cada vez mais presente na população mundial, sendo necessários estudos que forneçam indícios entre o elo desses pacientes com os diabéticos. Assim, inicialmente será utilizado um modelo de ratas Wistar idosas com resistência à insulina para avaliar parâmetros inflamatórios, incluindo a detecção dos níveis de citocinas plasmáticas pró- e anti-inflamatórias, e parâmetros oxidativos circulantes, através da detecção da produção de espécies reativas de oxigênio, expressão de subunidades da NADPH oxidase e razão glutationa reduzida e oxidada (GSH/GSSG) em neutrófilos. O baço e linfonodos serão analisados para determinar as subpopulações celulares e citocinas presentes. (AU)

Efeito do sulfeto de hidrogênio (H2S) no remodelamento das vias aéreas e nos níveis de citocinas na inflamação alérgica pulmonar

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Universidade São Francisco (USF). Campus Bragança Paulista. Bragança Paulista, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Heloisa Helena de Araujo Ferreira
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Farmacologia
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/21230-1
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 31 de dezembro de 2013
Assunto(s):AsmaCamundongosPulmãoInflamação
Resumo
A asma alérgica é uma doença caracterizada por hiperreatividade brônquica e pela inflamação crônica das vias aéreas com importante infiltrado de eosinófilos, mastócitos e linfócitos T auxiliares (Th), cujo surgimento é decorrente da ação das citocinas derivadas dos linfócitos Th1, Th2 e Th3. A resposta do linfócito Th2 pode ser induzida pela interleucina (IL)-25 que influência tanto a indução como a amplificação da inflamação alérgica pulmonar em ratos, possivelmente por retardar a apoptose, promovendo a persistência dos eosinófilos nas vias aéreas dos asmáticos. Dentre os radicais gasosos que exercem importantes funções em vários aspectos fisiológicos e patológicos pulmonar, muita atenção tem sido dada ao sulfeto de hidrogênio (H2S), que mostrou influenciar a resposta inflamatória e o remodelamento das vias aéreas. O H2S também diminuiu os níveis de IL-6 e -8 na inflamação não alérgica pulmonar, além de reduzir in vitro a síntese de IL-1beta, -6 e TNF-alfa e aumentar a IL-10 pelos macrófagos. Pesquisas recentes do nosso laboratório demonstraram que o tratamento com o doador de H2S, o hidrossulfeto de sódio - NaHS, teve efeito benéfico na inflamação alérgica pulmonar por diminuir a infiltração de eosinófilos e o estresse oxidativo. O objetivo do presente projeto de pesquisa é verificar o efeito do H2S no remodelamento das vias aéreas e nos níveis de citocinas relacionadas à alérgica, com a IL-1beta, IL-4, IL-5, IL-10, IL-25, TNF-alfa, eotaxin, TGF-beta1 and VEGF. (AU)

Estratégias para minimização do estresse oxidativo em sistemas de produção in vitro de embriões bovinos destinados à vitrificação

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Gisele Zoccal Mingoti
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Processo:12/10083-8
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 03 de maio de 2016
Assunto(s):Estresse oxidativoAntioxidantesApoptose
Resumo
Uma vez que embriões bovinos produzidos in vitro são mais susceptíveis aos danos oxidativos, a suplementação com antioxidantes tem se mostrado eficiente para melhorar a qualidade embrionária. Além destes, outros fatores já demonstraram desempenhar importante papel no desenvolvimento embrionário em condições adversas, como por exemplo, fatores de crescimento. Visando melhorar a qualidade, o potencial de desenvolvimento e o sucesso da criopreservação de embriões bovinos, este estudo tem como principal objetivo promover modificações em algumas etapas do sistema de produção in vitro para minimizar os danos decorrentes do estresse oxidativo. Para tanto, em uma primeira etapa (Experimento I), os oócitos serão maturados in vitro em meio TCM-199 Bicarbonato (B-199) suplementado com 0,6 mM de cisteína associado à 100 µM de cisteamina (C+C), 100 UI de catalase (CAT) ou 0,6 mM de cisteína associado à 100 µM de cisteamina e à 100 UI de catalase (C+C+CAT), ou ainda sem suplementação com antioxidantes (Controle) e serão avaliados quanto à competência e qualidade oocitária. O grupo experimental que proporcionar os melhores resultados (qualidade de oócitos e posterior desenvolvimento embrionário) será utilizado nos experimentos subsequentes. No Experimento II, serão avaliados os efeitos da suplementação com fatores de crescimento e/ou citocinas durante o CIV em situação geradora de estresse oxidativo (na presença de menadiona), sobre o desenvolvimento e potencial oxidativo de embriões bovinos produzidos in vitro. Para tanto, oócitos serão maturados in vitro em meio pré-definido no experimento I e os prováveis zigotos serão CIV em meio SOF suplementado com 100 ng/mL de IGF-I (IGF-I) na presença ou ausência de 1 µM de menadiona. Os embriões serão avaliados quanto a sua qualidade (níveis de GSH, presença de ROS ou taxa de apoptose) e os grupos que proporcionarem os resultados mais promissores serão utilizados no Experimento III, quando serão avaliados os efeitos da adição de antioxidantes durante a MIV associada à suplementação com IGF-I durante o CIV sobre o desenvolvimento e criotolerância embrionárias, bem como o padrão de expressão gênica. Para tanto, oócitos serão maturados in vitro em meio pré-definido no Experimento I e os zigotos serão CIV nas condições definidas no Experimento II, na presença ou ausência de menadiona. Os blastocistos obtidos serão destinados à vitrificação ou avaliação da expressão dos genes Bcl-2, BAX, GPX e MnSOD. (AU)

Investigação dos efeitos do extrato de Castanha do Brasil (Bertholletia excelsa) sobre os danos agudos induzidos pelo cádmio na espermatogênese e outros parâmetros reprodutivos de ratos wistar

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Saúde e Sociedade (ISS). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Baixada Santista. Santos, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Odair Aguiar Junior
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/15172-9
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 31 de dezembro de 2013
Assunto(s):SelênioEstresse oxidativoEspermatogêneseCádmio
Resumo
A espermatogênese, assim como outros parâmetros reprodutivos do macho, têm se mostrado alterada mediante uma série de condições endógenas e/ou exógenas das mais variadas naturezas, fato que têm contribuído para a diminuição da fertilidade masculina ao longo dos últimos 50 anos. Compostos encontrados no meio ambiente, em geral como contaminantes que resultam da ação humana, fazem parte de um rol de substâncias capazes de desregular o sistema endócrino e afetar o sistema reprodutor masculino. Dentre essas substâncias destaca-se o cádmio, metal encontrado em concentrações importantes em algumas culturas agrícolas, como componente do cigarro, como contaminante de solos e em resíduos industriais. O cádmio tem os testículos como um de seus grandes alvos, mesmo em pequenas concentrações. Nesse órgão ele causa alterações intensas no epitélio seminífero e no compartimento intersticial, que levam a um completo desarranjo na espermatogênese e na produção hormonal, levando à infertilidade. Diversos estudos têm demonstrado que o cádmio, além de sua ação direta, desencadeia processos oxidativos que potencializam seus efeitos teciduais. Inúmeros trabalhos na literatura mostram uma busca incessante por substâncias antioxidantes que possam combater ou proteger contra esses efeitos reprodutivos do cádmio. Na presente proposta, um alimento de produção abundante no nosso País será testado em animais contaminados pelo cádmio: a castanha do Brasil, na forma de um extrato. O extrato de castanha é rico em selênio e outras substâncias com potencial antioxidante. Será utilizado em animais contaminados com cádmio em um ensaio de curto prazo (7 dias). Nossos objetivos são os de caracterizar a resposta a esse composto, aferindo parâmetros reprodutivos e o status de marcador antioxidante, buscando com isso evidências de seus benefícios na proteção contra os danos causados pelo cádmio. (AU)

Efeito do ambiente endócrino peri-ovulatório na via de síntese das poliaminas no endométrio durante a primeira semana do ciclo estral em bovinos

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Mario Binelli
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Processo:12/23532-5
Vigência: 01 de janeiro de 2013 - 31 de janeiro de 2015
Assunto(s):VacasReprodução animalPoliaminas
Resumo
A eficiência reprodutiva é o fator que mais influencia a produtividade e a lucratividade de um rebanho. Entretanto, a realidade nacional atual é que mesmo utilizando protocolos hormonais que melhoram o índice de animais inseminados, as taxas de prenhez permanecem baixas após a primeira IA, indicando que uma proporção significativa de fêmeas inseminadas falhou em se tornar prenhe. Sabe-se que uma parcela significativa das falhas de concepção resulta de mortalidade embrionária precoce e que este fato pode estar relacionado a vários fatores que interferem no ambiente uterino pré-implantação. A premissa da presente proposta é que variações nas concentrações de P4 regulam a expressão gênica do endométrio e, consequentemente, a composição qualitativa e quantitativa das secreções uterinas, influenciando, dessa forma, a capacidade receptiva do útero ao desenvolvimento inicial do concepto. Entre as diversas vias moleculares que estão associadas à qualidade do ambiente uterino propõe-se aqui estudar as poliaminas, a proliferação celular e o estresse oxidativo. Poliaminas são cátions orgânicos reguladores de processos celulares tais como crescimento, desenvolvimento e diferenciação e, acreditamos que estejam sob a regulação do milieu endócrino peri-ovulatório. A proliferação celular endometrial bem como o mecanismo associado ao ambiente redox também regulam a qualidade do ambiente uterino e estão sob regulação dos hormônios esteroides em outras espécies. O presente trabalho tem como hipótese central que o ambiente endócrino peri-ovulatório regula a via de síntese das poliaminas, a proliferação celular e também o ambiente redox no endométrio durante a primeira semana do ciclo estral em bovinos. Para tanto, a abundância dos transcritos, a expressão de algumas proteínas-chave nas vias moleculares citadas acima, assim como a sua distribuição tecidual e celular serão analisadas nos tecidos endometriais e comparados entres dois grupos com concentrações distintas de P4 pós-ovulação. Tais grupos foram obtidos através da manipulação hormonal do crescimento do folículo pré-ovulatório, que objetivou induzir a ovulação de folículos de tamanhos maiores que resultou em corpos lúteos maiores e maior produção de P4 pós-ovulação (grupo Folículo Grande; FG) ou o oposto (grupo Folículo Pequeno; FP). Espera-se que moléculas que compõem estas vias sejam diferencialmente reguladas nos grupos FG e FP. A possível modulação destas vias moleculares por diferentes ambientes endócrinos peri-ovulatórios será fundamental na definição de assinaturas moleculares associadas à maior ou menor probabilidade de sucesso gestacional. Mais especificamente, espera-se que moléculas identificadas como diferencialmente reguladas pelo modelo experimental proposto possam ser futuramente investigadas como potenciais marcadores prognósticos ou diagnósticos do sucesso gestacional. (AU)

Expressão do RNA mensageiro dos genes TXNIP, SCL19A2 e SCL19A3 no sedimento urinário de portadores de Diabetes mellitus tipo 1 com e sem nefropatia diabética

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Maria Lucia Cardillo Corrêa Giannella
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/05583-1
Vigência: 01 de dezembro de 2012 - 31 de março de 2015
Assunto(s):TiaminaEndocrinologiaDiabetes mellitus tipo 1Nefropatias diabéticasEstresse oxidativoTiorredoxinasRNA mensageiroBiomarcadores
Resumo
A nefropatia diabética (ND) é classicamente dividida em cinco estágios, com as seguintes características: 1) hiperfiltração glomerular; 2) excreção urinária de albumina (EUA) normal; 3) ND incipiente com microalbuminúria persistente; 4) ND franca caracterizada por proteinúria e queda da taxa de filtração glomerular (TFG) e 5) doença renal terminal. Vários estudos têm mostrado, entretanto, que a EUA e o declínio da função renal podem não evoluir de forma paralela e que a TFG pode diminuir na ausência de EUA anormal. Além disso, evidências recentes sugerem que em pacientes com doença renal crônica (DRC), a extensão da disfunção renal parece correlacionar-se melhor com a lesão tubulointersticial do que com glomerulopatia. É sabido que as concentrações de marcadores do estresse oxidativo estão aumentadas em pacientes com diabetes mellitus (DM). O sistema tiorredoxina (Trx) é um dos principais sistemas antioxidantes endógenos. A Trx é capaz de interagir com um grande número de fatores de transcrição e proteínas, tal como a Trx interacting protein (TXNIP). Recentemente, a participação da TXNIP tem sido reconhecida na patogênese do DM e de suas complicações. A deficiência de tiamina, ou vitamina B1, já foi relatada em modelos experimentais de DM, concomitantemente a um aumento de seu clearance renal. O transportador de tiamina 1 (THTR-1), codificado pelo gene SLC19A2 e o transportador de tiamina 2 (THTR-2), codificado pelo gene SLC19A3, são os responsáveis pela reabsorção de tiamina no túbulo proximal após sua filtração no glomérulo renal. Estudos já demonstraram que a excreção aumentada de tiamina pode ser um risco preditivo de declínio precoce da função renal em pacientes diabéticos. O objetivo deste projeto é estudar a participação dos genes TXNIP, SLC19A2 e SLC19A3 na patogênese da ND em portadores de DM1. Para tanto, será extraído RNA mensageiro do sedimento urinário de portadores de DM 1 para avaliação da expressão dos genes alvos, que será associada com as manifestações da ND em quatro grupos de pacientes: (1) normoalbuminúria e TFG >60 mL/min; (2) normoalbuminúria e TFG <60 mL/min; (3)macroalbuminúria e TFG >60 mL/min e (4) macroalbuminúria e TFG <60 mL/min. O estudo da ativação ou inativação intrarenal de vias potencialmente associadas à evolução da ND em seres humanos é dificultada pela necessidade de biópsia renal. Com o desenvolvimento recente de técnicas confiáveis de extração de RNA do sedimento urinário e da técnica de RT-qPCR, a análise do mRNA do sedimento urinário pode se tornar uma ferramenta na avaliação das doenças renais, tanto na tentativa de identificar biomarcadores que possam predizer a evolução da função renal como para permitir um melhor entendimento da patogênese dessa complicação. (AU)

Oxigênio singlete e peróxidos em química biológica

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Paolo Di Mascio
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Temático
Processo:12/12663-1
Vigência: 01 de dezembro de 2012 - 30 de novembro de 2016
Assunto(s):DnaPeróxidosOxigênio singletoEspectrometria de massasOxirredução
Resumo
O metabolismo aeróbico e diversas reações envolvidas em processos toxicológicos e farmacológicos podem gerar espécies "reativas" de oxigênio e de nitrogênio capazes de provocar danos em biomoléculas e desencadearem processos deletérios. A célula encontra-se protegida contra esses danos por uma linha de defesa antioxidante, onde enzimas e compostos biológicos desempenham um papel importante. O equilíbrio entre os processos pró-oxidantes e antioxidantes constitui a condição normal da vida aeróbica. O desequilíbrio favorável ao estado pró-oxidante desencadeia o chamado estresse oxidativo. A formação do oxigênio singlete (1O2) em sistemas biológicos tem sido amplamente demonstrada e relacionada com processos celulares diversos tais como o mecanismo de defesa contra vírus e bactérias, promovido por células fagocitárias. O oxigênio singlete é uma das principais espécies envolvidas nos efeitos citotóxicos da terapia fotodinâmica. Além disso, 1O2 está relacionado com ativação da expressão gênica induzida por luz UV-A. O 1O2 apresenta alta reatividade, oxida muitas funções orgânicas ricas em elétrons, como sulfetos, aminas e fenóis. Sendo assim, são importantes alvos biológicos do 1O2 moléculas fundamentais como ácidos graxos insaturados, proteínas e DNA. Entretanto, mostrar inequivocamente o papel do oxigênio singlete em sistemas biológicos tem sido difícil devido a dificuldades em se obter 1O2 livre de outras espécies reativas. Os nossos estudos estão centralizados em desvendar os mecanismos pelos quais espécies reativas de oxigênio, principalmente o oxigênio singlete, desempenham papéis fisiológicos e patológicos. Com este intuito sintetizamos fontes apropriadas de 1O2 baseadas na termólise de endoperóxidos. Esses compostos são quimicamente inertes e têm sido empregados como fontes versáteis e "limpas" de 1O2. Essa abordagem tem sido utilizada em nossos trabalhos para a detecção de lesões em biomoléculas (DNA, lipídeos e proteínas) e para investigar compostos de ocorrência natural com atividade de supressão de 1O2. Os estudos sobre a peroxidação de lipídios têm aumentado nos últimos anos devido a descobertas sobre o papel dos hidroperóxidos lipídicos em câncer de pele induzido por UV, aterosclerose, doenças neurodegenerativas e diversas outras patologias. Os peróxidos (ROOH) são compostos potencialmente deletérios capazes de promover danos em biomoléculas, incluindo proteínas e DNA. Por terem, geralmente, vida média mais longa que os radicais livres precursores, tornam possíveis translocações na célula, entre células, ou entre lipoproteínas e células. Desta forma, a toxicidade dos ROOH e suas ações como efetores podem se manifestar em locais da célula mais distantes do seu sítio de formação. Estudos recentes sugerem que ROOH estão envolvidos nos eventos iniciais responsáveis pela liberação do citocromo c da mitocôndria e indução da apoptose. Tal sinalização pode determinar se uma célula vai sobreviver, ou não, frente a um insulto oxidativo. Grande parte dos efeitos citotóxicos e genotóxicos de ROOH tem sido atribuídos a formação de radicais livres e de produtos secundários e terciários resultantes de sua decomposição. Este estudo tem por objetivo investigar a formação de oxigênio singlete via hidroperóxidos de lipídios, proteínas e DNA em sistemas biológicos. Reações de oxigênio singlete com biomoléculas e os mecanismos biológicos associados à formação desta espécie também serão investigados. A formação e a caracterização das reações envolvidas nos mecanismos citotóxicos e genotóxicos mediados pelos ROOH em sistemas biológicos também são objetivos deste projeto. Com este intuito serão desenvolvidas metodologias para a detecção e quantificação de diferentes classes de ROOH, baseadas em HPLC-MS/MS utilizando compostos marcados isotopicamente como padrões internos. Também serão caracterizados danos em proteínas, em particular no citocromo c, e em DNA mitocondrial resultantes da interação com ROOH. (AU)

Avaliação morfofuncional e estresse oxidativo no intestino de camundongos distróficos (mdx)

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Viviane Louise Andree Nouailhetas
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Geral
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/15716-9
Vigência: 01 de dezembro de 2012 - 31 de maio de 2015
Assunto(s):Distrofia muscular de DuchenneDistrofinaMúsculo esqueléticoIntestinosEstresse oxidativo
Resumo
A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é a mais freqüente entre as distrofias musculares, e é causada pela ausência da proteína distrofina. A musculatura esquelética é o principal alvo da doença, no entanto, já são descritas alterações em outros órgãos e sistemas, como o trato gastrintestinal. Um dos modelos animais da doença mais utilizados é o camundongo mdx, que apresenta grande parte das características da distrofia. Em nosso projeto anterior, descrevemos algumas alterações intestinais como um menor dano oxidativo e redução na espessura da camada muscular do intestino. Sabendo que o intestino é um órgão-alvo de diversos fatores estressantes (e. g. exercício físico e privação de sono), no presente projeto pretendemos estudar o efeito da distrofia na estrutura e função do intestino de camundongos. Mais especificamente serão estudados os seguintes aspectos: 1) morfologia do intestino, avaliando além da estrutura geral, a presença de fibras colágenas, e dos plexos nervosos, além da ultra-estrutura dos miócitos. 2) avaliação reatividade intestinal, ampliando os conhecimentos até então obtidos, explorando outras vias de sinalização celular, como a serotoninergica, 3) estresse oxidativo, com a avaliação da oxidação de macromoléculas, capacidade antioxidante do tecido e a expressão de enzimas antioxidantes e 4) avaliação da composição corporal e do metabolismo energético. Dessa forma, com esse projeto pretendemos entender se a maneira com que a DMD afeta o músculo esquelético se assemelha à maneira com que afeta a musculatura lisa intestinal, podendo estabelecer diretrizes para aliviar sintomas gastrintestinais em pacientes com DMD. (AU)

Avaliação das propriedades estruturais, mecânicas e funcionais em artérias de resistência de ratos espontaneamente hipertensos antes e após o desenvolvimento da hipertensão arterial

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Luciana Venturini Rossoni
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/11376-9
Vigência: 01 de dezembro de 2012 - 31 de março de 2014
Assunto(s):Estresse oxidativoHipertensãoReatividade cardiovascular
Resumo
A hipertensão arterial (HA) é uma patologia caracterizada pela elevação crônica da pressão arterial. Esta é uma doença de origem multifatorial, capaz de acarretar inúmeras alterações em órgãos vitais do organismo como o encéfalo, os rins, o coração e os vasos sanguíneos. Nestes últimos, as alterações associadas à HA têm sido amplamente investigadas e tem-se buscado cada vez mais a elucidação de mecanismos que contribuam para a gênese e/ou manutenção dessa enfermidade. Porém, ainda não estão completamente elucidados os mecanismos envolvidos no estabelecimento da HA, sendo a compreensão desses mecanismos de fundamental importância, em especial por essa doença possuir maior prevalência entre as enfermidades cardiovasculares e por se tratar de uma doença ainda considerada sem cura, contando apenas com estratégias terapêuticas que visam o seu controle. Sabe-se que a HA é uma enfermidade caracterizada por um aumento da resistência vascular periférica, na qual as artérias de resistência desempenham importante papel. Já foi descrito que as artérias de resistência tanto de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) como de pacientes com HA essencial apresentam: 1. Estruturalmente e mecanicamente, remodelamento eutrófico, com aumento da espessura da túnica média, mas área de secção transversa preservada, acompanhados de diminuição do lúmen e consequente aumento da razão parede/luz e um aumento da rigidez; 2. Funcionalmente, disfunção endotelial e aumento da resposta contrátil. Contudo, os mecanismos através dos quais essas características se estabelecem ainda não são totalmente esclarecidos. Poucos estudos têm como foco comparar artérias de resistência antes e após o estabelecimento da HA, e os que já o fizeram foram direcionados para avaliar as diferenças estruturais e/ou morfométricas isoladamente, mas não as características mecânicas. Além do que não se abordam as inter-relações entre estrutura, função e mecânica desses vasos como possíveis determinantes para o desenvolvimento do processo de gênese da HA. Assim, o presente estudo buscará avaliar as características estruturais, mecânicas e funcionais de artérias de resistência (do leito mesentérico) em SHR, comparando indivíduos jovens, antes do estabelecimento da HA, e adultos, com a HA estabelecida, com os seus respectivos controles normotensos (WKY). Os resultados obtidos no presente projeto poderão indicar a relação entre os ajustes estruturais e funcionais no desenvolvimento da elevação da pressão arterial em SHR's, bem como possíveis relações de causa e consequência que contribuem para a gênese da HA. (AU)

Perfil inflamatório de macrófagos da cavidade peritoneal e do tecido adiposo de ratos após administração crônica de albumina modificada por glicação avançada

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Marisa Passarelli
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Processo:12/18724-2
Vigência: 01 de dezembro de 2012 - 30 de novembro de 2015
Assunto(s):Tecido adiposoEndocrinologiaMacrófagosDiabetes mellitus
Resumo
Produtos de glicação avançada (AGE) contribuem para a gênese e progressão das complicações crônicas do diabete melito (DM). Em macrófagos, os AGE aumentam a captação de lipoproteínas ricas em colesterol e reduzem o efluxo deste esterol para as HDL. Além disso, os AGE induzem estresse oxidativo e inflamatório nestas células. Isto deve contribuir para a progressão da aterosclerose, tanto do ponto de vista arterial como periférico, uma vez que macrófagos infiltrados em diferentes órgãos e tecidos podem modular a resposta inflamatória local e o metabolismo anormal de lípides nos mesmos. O objetivo deste projeto é avaliar o efeito da administração crônica de albumina-AGE, associada ou não ao tratamento com o antioxidante N-acetilcisteína, sobre o perfil inflamatório de macrófagos infiltrados na cavidade peritoneal e no tecido adiposo de ratos. Nossa hipótese é que os AGE aumentam o estresse inflamatório de macrófagos, independentemente da hiperglicemia, e que o tratamento com NAC possa prevenir/reverter este efeito. Ratos Wistar serão divididos aleatoriamente em 4 grupos experimentais, recebendo: 1) abumina controle (C), 2) albumina C+ N-acetilcisteína, 3) albumina AGE e 4) albumina AGE + N-acetilcisteína, por 90 dias. Albumina C ou AGE (20 mg/kg/dia) será injetada diariamente na cavidade peritoneal e NAC, na água de beber. Será determinado o perfil histológico do tecido adiposo e a diferenciação de macrófagos M1 e M2, bem como a expressão de mRNA de citocinas, RAGE, AGE-R1 e CD-36. Nos macrófagos peritoneais será determinada a produção de citocinas e ROS e a expressão de mRNA de citocinas, RAGE, AGE-R1 e NF-kB, bem como a atividade de ligação de NF-kB binding ao promotor do gene Ager. Os achados serão importantes para a compreensão dos mecanismos pelos quais os AGE favorecem a evolução do estado inflamatório em macrófagos peritoneais e infiltrados no tecido adiposo e, assim, sua contribuição para as complicações do DM. (AU)

Papel da mutação ALDH2*2 na insuficiência cardíaca: potencial terapêutico da Alda-1

Beneficiário:
Instituição-sede da pesquisa: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Julio Cesar Batista Ferreira
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Processo:12/19379-7
Vigência: 01 de dezembro de 2012 - 30 de setembro de 2015
Assunto(s):Mitocôndrias
Resumo
Os conhecimentos sobre a fisiopatologia das doenças cardiovasculares estabeleceram que a formação e o acúmulo de aldeídos decorrentes do estresse oxidativo são extremamente cardiotóxicos e contribuem para o aparecimento e/ou agravamento dessas doenças. Dentre os diversos aldeídos acumulados no coração, o 4-hidroxi-2-nonenal (4-HNE), originado a partir da oxidação de fosfolipídios presentes na membrana interna da mitocôndria, é capaz de atacar aminoácidos nucleofílicos e formar adutos com proteínas, resultando na inativação da proteína-alvo e consequente disfunção celular. A principal enzima responsável pela eliminação do 4-HNE é a aldeído desidrogenase 2 (ALDH2), localizada na matriz mitocondrial. Tanto a inibição farmacológica, quanto genética da ALDH2 resulta em acúmulo de 4-HNE e maior lesão do miocárdio. Atualmente, estima-se que 14% da população mundial apresenta uma mutação pontual da ALDH2 (ALDH2*2) que confere perda de até 95% na sua atividade enzimática. No presente projeto de pesquisa pretendemos avaliar se camundongos que apresentam a mutação ALDH2*2 são mais suscetíveis aos danos cardíacos oriundos do infarto do miocárdio e à progressão da insuficiência cardíaca (IC).A IC é uma síndrome clínica de mau prognóstico caracterizada por disfunção cardíaca associada à intolerância aos esforços, retenção de fluido e redução da longevidade. Nos últimos anos, o conhecimento sobre a fisiopatologia da IC estabeleceu que além dos distúrbios hemodinâmicos e neuro-hormonais associados à síndrome, alterações no metabolismo mitocondrial e consequente desbalanço redox podem prejudicar a função cardíaca. Baseado nessa premissa, levantamos a hipótese que a inativação da ALDH2 decorrente da mutação pontual ALDH2*2 exacerbará o acúmulo de 4-HNE, a formação de adutos de Michaelis e o agravamento da disfunção ventricular frente ao infarto do miocárdio. Com o objetivo de melhor compreender o papel da ALDH2 na IC, pretendemos caracterizar o perfil de expressão proteica e atividade da ALDH2 no coração de camundongos, selvagens e mutantes, com IC de etiologia isquêmica. Além disso, avaliaremos o acúmulo de adutos de Michaelis, proteínas carboniladas e peroxidação lipídica cardíaca. Considerando que o acúmulo de adutos de Michaelis pode prejudicar o metabolismo celular, avaliaremos em mitocôndria isolada do tecido cardíaco dos animais: o consumo de oxigênio, a produção de peróxido de hidrogênio, o potencial da membrana interna e a captação máxima de cálcio. Por fim, serão analisados: o remodelamento ventricular esquerdo, função cardíaca e a contratilidade/transiente de cálcio nos cardiomiócitos isolados desses animais.Considerando que resultados prévios do nosso grupo demonstram uma ineficiência da ALDH2 na remoção de aldeídos citotóxicos em animais portadores de IC, será de grande valia estudar o efeito do tratamento sustentado com o ativador seletivo da ALDH2, Alda-1, sobre os parâmetros descritos acima nos animais selvagens e mutantes para a ALDH2. A molécula Alda-1, desenvolvida pelos nossos colaboradores da Universidade de Stanford-CA,EUA, é capaz de corrigir a perda de função da ALDH2 decorrente da mutação ALDH2*2. Sendo assim, no presente projeto de pesquisa temos como objetivo: 1) compreender o papel da mutação ALDH2*2 na progressão da IC de etiologia isquêmica e 2) estudar o possível efeito corretor da Alda-1 sobre a inativação da ALDH2 decorrente da mutação ALDH2*2, bem como sua consequência sobre a função e estrutura cardíaca, metabolismo mitocondrial e balanço redox. Esse estudo torna-se interessante uma vez que a compreensão mais detalhada do papel da mutação pontual da ALDH2 na progressão da IC poderá contribuir para o futuro emprego de terapias que atuem em mecanismos-chave envolvidos na fisiopatologia da IC, como o ativador da ALDH2, Alda-1. (AU)
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