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Resumo

O objetivo deste projeto é o de investigar a presença e distribuição da miosina Va de cérebro em tecido nervoso de vertebrados primitivos utilizando como modelo peixes (truta arco-íris). Os peixes teleósteos possuem uma citoarquitetura cerebral relativamente simples constituindo um excelente modelo para estudos de desenvolvimento, estrutura e função do sistema nervoso e de proteínas motoras envolvidas na fisiologia neural. Ainda, a histogênese e anatomia do encéfalo e medula espinhal dos salmonídeos é bastante conhecida e descrita na literatura. A miosina V de cérebro participa em processos de neurotransmissão, motilidade de cones de crescimento e translocação de organelas. Sua essencialidade é comprovada pela análise do fenótipo de camundongos mutantes dilute e de humanos portadores da Síndrome de Griscelli, onde ambos apresentam mutações do gene que codifica a miosina V e manifestam alterações fisiológicas neurais, imunológicas e de pigmentação. Apesar da ampla distribuição nos diferentes táxons, sua presença e distribuição tecidual em peixes não têm sido até o momento investigada. Este projeto visa, portanto, a verificação da expressão da miosina Va de cérebro em indivíduos adultos de truta arco-íris, e a correlação da histofisiologia de populações específicas de células neurais com a função motora e/ou estrutural das miosinas-V. (AU)

Resumo

A repercussão na função pancreática endócrina da ingestão de dieta com alto teor de lipídeos tem sido pouco Investigada. Trabalhos descrevendo alterações funcionais, histológicos e morfométricas do pâncreas endócrino no modelo animal que utiliza camundongos que desenvolvem um quadro de diabetes melito do tipo 2 como resultado da ingestão de ração hiperlipídica são escassos e Inconsistentes. Os objetivos do presente projeto são: 1) fazer-se uma avaliação metabólica deste modelo animal de diabetes tipo 2, analisando-se os parâmetros de peso do animal, glicemia (em jejum e pós-prandial), resposta ao teste de tolerância à glicose (GTT) e ao teste de tolerância â insulina (ITT) , e 2) investigar os aspectos funcionais (secreção pancreática total de insulina e secreção estática estimulada de insulina em ilhotas isoladas) bem como os aspectos histológicos (estrutura e citoarquitetura) e morfométricos (número total de ilhotas por pâncreas, área absoluta e relativa da ilhota e célula B) do pâncreas endócrino nestes animais submetidos à dieta hiperlipídica. Para estudar esses parâmetros nas fases iniciais do desenvolvimento do diabetes neste modelo, camundongos da linhagem C57BL/6 serão alimentados com esta dieta por um período de 30 ou 60 dias. Ainda, serão empregados animais machos e fêmeas para se investigar possíveis diferenças sexuais. (AU)

Resumo

O presente trabalho tem como objetivo estudar os efeitos da desnutrição e renutrição proteica no fígado, sob os aspectos morfométricos, estereológico e quantitativo. Assim sendo serão utilizados quinze camundongos Swiss machos com 60 dias de idade aos quais foram oferecidos água sem restrições (Ad libidum), uma dieta proteica (12% de proteína-caseina) ou uma dieta hipoproteica (2% de caseina), sendo um grupo de animais renutrido com dieta normoproteica. Aos 21 dias os animais serão ortoeutanasiados e será retirado o fígado. Para o estudo histológico qualitativo e quantitativo, o material será fixado com solução de Karnovsky modificado (Glutaraldeído 5% e formoldeído 1%) em tampão de cacodilato de sódio (0,125 M e pH 7.4). Em seguida, o material será desidratado em séries de alcoóis e posteriormente embebido em araldite. Cortes sistemáticos serão realizados e métodos estereológicos serão empregados para estimar o volume do fígado com respectivo "intervalo de confiança", número total de hepatócitos, bem como seu volume. Desta forma, espera-se que os dados gerados por este estudo possam avaliar (com acurácia tridimensional) os efeitos da desnutrição e renutrição na celularidade hepática. Palavras-chave: Estereologia, Desnutrição, Fígado. (AU)

Resumo

O núcleo supraquiasmático (NSQ), principal relógio biológico circadiano em mamíferos, contém uma variedade de diferentes neurônios os quais tendem a formar grupos organizados em seu interior (Moore et al., 2002). As descrições dos padrões de distribuição destes tipos celulares, assim como, das principais terminações aferentes a este núcleo e suas relações levaram alguns autores a dividi-lo anatomo-funcionalmente em: porção ventrolateral e porção dorsomedial ou ainda cerne (do inglês core) e concha (do inglês shell) (Moore et al., 2002). Embora tal nomenclatura tenha sido extrapolada para várias espécies, esta organização intrínseca tende a apresentar diferenças nas espécies já estudadas e pouco se sabe sobre a citoarquitetura deste núcleo em primatas (Morin e Allen, 2005; Morin et al., 2006; Pinato et al.,2007). O presente estudo, complemento de projeto do laboratório em curso com pós-doc e doutoranda, propõe a caracterização química do NSQ do primata diurno Cebus apella utilizando métodos com reações de imunoistoquímica e imunofluorescência para avaliar o padrão de distribuição dos principais grupos neuronais e projeções aferentes a este núcleo, assim como suas relações. Os resultados preliminares mostram que, nesta espécie, o NSQ apresenta organização complexa caracterizada por grupos celulares peptidérgicos (vasopressina (VP), calbidina (Calb) e calretinina (Cair)) e terminações aferentes (neuropepideo Y (NPY), serotonina (5-HT) e terminais retinianos (CTb-ir)) que na maioria dos casos apresentam diferenças de localização em comparação a roedores. Os dados preliminares suportam a hipótese de que há importantes diferenças interespecíficas na estrutura e características intrínsecas do NSQ e que, em primatas a organização deste núcleo deve ser mais complexa do que a organização classicamente dividida em "core" e "shell", ou seja cerne e concha, (Morin et al., 2006). (AU)

Resumo

O treinamento de um técnico de nível superior é importante para a continuidade do projeto de pesquisa. Há uma grande quantidade de material disponível para o projeto e várias metodologias de rotina são empregadas no seu processamento técnico. Nosso projeto temático tem obtido resultados interessantes que foram recentemente apresentados em congressos e publicados em periódicos internacionais (Bando et al 2011, Allegro et al 2012). O treinamento de um técnico de nível superior é necessário para suprir o processamento de rotina das amostras e também permitirá aumentar a eficiência da coleta de dados histopatológicos referentes ao projeto. O treinamento deve incluir processamento do tecido cerebral e capacitacao para coleta e analise de dados basicos de histopatologia e imunohiostoquimica. Em resumo, os hipocampos serão fixados por imersão, crioprotegidos, congelados e cortados em criostato para obtenção de fatias com 60 µm de espessura. Uma em cada cinco fatias histológicas será montada em lâmina gelatinizada para coloração de Nissl (Violeta de Cresila) e as demais armazenadas em solução crioprotetora para posterior estudo imunohistoquímico. Três fatias representativas das porções inicial, média e final de cada hipocampo serão coradas por hematoxilina-eosina (HE) e encaminhadas para exame e registro anatomopatológico. O hipocampo inteiro de cada caso será utilizado (média de 50-60 fatias/paciente). Serão excluídos casos com artefatos de processamento que prejudiquem e/ou inviabilizem as análises subsequentes. A análise morfométrica compreende as medidas lineares obtidas na camada granular do giro denteado, focalizando áreas de dispersão. A análise será feita nas imagens de quatro fatias do corpo de cada hipocampo processado para coloração de Nissl, adquiridas com um estereomicroscópio e utilizando-se o programa Image J (Image J, NIH, Bethesda, Maryland, USA). A avaliação semiquantitativa dos hipocampos escleróticos será feita em quatro fatias do corpo do hipocampo. Serão focalizadas as alterações do giro denteado, particularmente a desorganização da citoarquitetura: perda e dispersão celular e bilaminação da camada granular. A perda celular será determinada como áreas de falha na continuidade ou diminuição da espessura da camada granular do giro denteado, sendo graduada de zero (sem perda) a quatro (perda total). A dispersão das células granulares será definida como áreas de "espalhamento" das células granulares além dos limites normais do giro denteado, sendo graduada de zero (sem alteração) a três (alteração muito intensa). A bilaminação será definida como duplicação bem definida do todo ou parte da camada granular e será descrita como presente (+) ou ausente (-). (AU)

Resumo

A desnutrição protéico-calórica é um problema de dimensões alarmantes, correspondendo a cerca de 40% das causas de hospitalização. Em virtude de sua complexidade metabólica e altas taxas de renovação e reposição celular o fígado é um dos orgãos mais afetados pela desnutrição. Portanto objetiva-se analisar, utilizando microscopia quantitativa tridimensional (Bioimagem e Estereologia), os efeitos da dieta hipoprotéica (e da reversão da mesma) na macro e microestrutura do fígado. Para tal utilizaremos vinte camundongos Swiss machos com idade inicial de 60 dias de idade (peso corpóreo médio inicial = 55 gramas ± 2DP) e provenientes de colônias mantidas pelo Biotério da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de São Paulo (USP). Os animais serão subdivididos em quatro grupos dependendo do tipo de dieta oferecido: Grupo I - animais nutridos (n=5); Grupo II - animais desnutridos (n=5); Grupo III - animais renutridos (n=5); Grupo IV - animais controle para os renutridos (n=5). Os animais do grupo I e IV receberão uma dieta normoprotéica (12% de caseina) e os animais dos grupo II e III receberão uma dieta hipoprotéica (2% de caseina). A renutrição será conduzida nos animais do grupo III, continuando-se a manter em paralelo animais do grupo IV. Após um mês recebendo ração hipoprotéica, os animais do grupo III receberão ração normoprotéica e água ad libitum. O processo de renutrição ocorrerá por mais 30 dias. Todos os animais serão eutanasiados e utilizados para a obtenção, além do fígado, do sangue, medula óssea e baço para as análises ulteriores. Do ponto de vista estereológico serão estimados o volume do fígado, o número total e o volume médio dos hepatócitos, o volume total de vasos no fígado e o volume total do tecido colágeno na matriz extracelular do fígado. Entende-se que os conhecimentos gerados por esta pesquisa serão fundamentais para o diagnóstico e tratamento das hepatopatias de origem nutricional. (AU)

Resumo

O treinamento de um técnico de nível superior é importante para a continuidade do projeto de pesquisa. Há uma grande quantidade de material disponível para o projeto e várias metodologias de rotina são empregadas no seu processamento técnico. Nosso projeto temático tem obtido resultados interessantes que foram recentemente apresentados em congressos e publicados em periódicos internacionais (Bando et al 2011, Allegro et al 2012). O treinamento de um técnico de nível superior é necessário para suprir o processamento de rotina das amostras e também permitirá aumentar a eficiência da coleta de dados histopatológicos referentes ao projeto. O treinamento deve incluir processamento do tecido cerebral e capacitacao para coleta e analise de dados basicos de histopatologia e imunohiostoquimica. Em resumo, os hipocampos serão fixados por imersão, crioprotegidos, congelados e cortados em criostato para obtenção de fatias com 60 µm de espessura. Uma em cada cinco fatias histológicas será montada em lâmina gelatinizada para coloração de Nissl (Violeta de Cresila) e as demais armazenadas em solução crioprotetora para posterior estudo imunohistoquímico. Três fatias representativas das porções inicial, média e final de cada hipocampo serão coradas por hematoxilina-eosina (HE) e encaminhadas para exame e registro anatomopatológico. O hipocampo inteiro de cada caso será utilizado (média de 50-60 fatias/paciente). Serão excluídos casos com artefatos de processamento que prejudiquem e/ou inviabilizem as análises subsequentes. A análise morfométrica compreende as medidas lineares obtidas na camada granular do giro denteado, focalizando áreas de dispersão. A análise será feita nas imagens de quatro fatias do corpo de cada hipocampo processado para coloração de Nissl, adquiridas com um estereomicroscópio e utilizando-se o programa Image J (Image J, NIH, Bethesda, Maryland, USA). A avaliação semiquantitativa dos hipocampos escleróticos será feita em quatro fatias do corpo do hipocampo. Serão focalizadas as alterações do giro denteado, particularmente a desorganização da citoarquitetura: perda e dispersão celular e bilaminação da camada granular. A perda celular será determinada como áreas de falha na continuidade ou diminuição da espessura da camada granular do giro denteado, sendo graduada de zero (sem perda) a quatro (perda total). A dispersão das células granulares será definida como áreas de "espalhamento" das células granulares além dos limites normais do giro denteado, sendo graduada de zero (sem alteração) a três (alteração muito intensa). A bilaminação será definida como duplicação bem definida do todo ou parte da camada granular e será descrita como presente (+) ou ausente (-). (AU)

Resumo

O câncer de mama é o tipo de neoplasia mais comumente detectada em mulheres de todo o mundo. Dentre as principais ferramentas para o tratamento de tumores mamário, a quimioterapia assume um papel de destaque, por prover aumento significativo da sobrevida dessas pacientes. A doxorrubicina constitui um dos mais potentes agentes quimioterápicos atualmente disponíveis. Muitos são os fatores e mecanismos, identificados em estudos in vitro, associados ao escape de células tumorais aos efeitos citotóxicos gerados por quimioterápicos. Entretanto, muito pouco ainda é conhecida sobre as respostas celulares a quimioterapia em um microambiente mais próximo do contexto tecidual. Muitas evidências suportam o importante papel da matriz extracelular (MEC) e do microambiente multicelular tridimensional na gênese e progressão tumoral. Por meio da dinâmica regulação da citoarquitetura e da expressão gênica, os elementos da MEC podem modular a regulação da resposta de células tumorais a quimioterapia. As culturas celulares de mama em três dimensões (3D) são uma valiosa ferramenta para o estudo do contexto celular 3D na carcinogênese. Este projeto tem como objetivo o estudo da função da MEC e da estrutura tridimensional na resposta de células de carcinoma mamário humano ao tratamento com doxorrubicina. Neste sentido, pretende-se comparar os efeitos deste agente quimioterápico sobre a resposta ao dano no DNA, ciclo e morte celular, em células cultivadas em monocamada sobre plástico e embebidas em membrana basal reconstituível. Dado o critico papel da proteína p53 no efeito de quimioterápicos e na reação celular a lesão no DNA, no presente projeto espera-se também avaliar o papel desse supressor de tumor em um contexto tridimensional. Além disso, por meio de uma análise proteômica, busca-se identificar as moléculas diferencialmente expressas entre células em duas e em três dimensões, responsáveis pelas distintas respostas desses modelos celulares à quimioterapia. (AU)

Resumo

A desnutrição protéico-calórica é um problema de dimensões alarmantes, correspondendo a cerca de 40% das causas de hospitalização. Em virtude de sua complexidade metabólica e altas taxas de renovação e reposição celular o fígado é um dos órgãos mais afetados pela desnutrição. Portanto objetiva-se analisar, utilizando microscopia quantitativa tridimensional (Bioimagem e Estereologia), os efeitos da dieta hipoprotéica (e da reversão da mesma) na macro e microestrutura do fígado. Para tal utilizaremos vinte camundongos Swiss machos com idade inicial de 60 dias de idade (peso corpóreo médio inicial = 55 gramas ± 2DP) e provenientes de colônias mantidas pelo Biotério da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de São Paulo (USP). Os animais serão subdivididos em quatro grupos dependendo do tipo de dieta oferecido: Grupo I - animais nutridos (n=5); Grupo II - animais desnutridos (n=5); Grupo III - animais renutridos (n=5); Grupo IV - animais controle para os renutridos (n=5). Os animais do grupo I e IV receberão uma dieta normoprotéica (12% de caseína) e os animais dos grupos II e III receberão uma dieta hipoprotéica (2% de caseina). A renutrição será conduzida nos animais do grupo III, continuando-se a manter em paralelo animais do grupo IV. Após um mês recebendo ração hipoprotéica, os animais do grupo III receberão ração normoprotéica e água ad libitum. O processo de renutrição ocorrerá por mais 30 dias. Todos os animais serão eutanasiados e utilizados para a obtenção, além do fígado, do sangue, medula óssea e baço para as análises ulteriores. Do ponto de vista estereológico serão estimados o volume do fígado, o número total e o volume médio dos hepatócitos, o volume total de vasos no fígado e o volume total do tecido colágeno na matriz extracelular do fígado. Entende-se que os conhecimentos gerados por esta pesquisa serão fundamentais para o diagnóstico e tratamento das hepatopatias de origem nutricional. (AU)

Resumo

A idealização deste trabalho se baseia na busca de uma melhora no tratamento oferecido às pacientes portadoras de neoplasias intra-epiteliais e de câncer do colo uterino. E com a utilização de fatores prognósticos corretamente pode-se antecipar a sobrevida e a resposta esperada ao tratamento destas pacientes portadoras tanto de lesões precursoras quanto de neoplasia maligna. Como o câncer do colo uterino possui uma alta taxa de incidência e mortalidade nos países em desenvolvimento, como o Brasil, e mesmo assim tem uma visibilidade secundária na comunidade científica, tendo sido um tema pouco recorrente em publicações nacionais e internacionais, propomos um estudo amplo e com objetivos práticos para melhor tratar estas patologias, definindo se há marcadores que devem ser utilizados e como eles devem ser interpretados para que se possa predizer toda a evolução de uma paciente que se apresente com neoplasia intra-epitelial do colo uterino. (AU)

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