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Impacto de ingrediente funcional sobre a microbiota intestinal e a saciedade em voluntários saudáveis

Beneficiário:Elizabete Wenzel de Menezes
Instituição: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Elizabete Wenzel de Menezes
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/24607-9
Vigência: 01 de abril de 2013 - 31 de março de 2015
Assunto(s):Alimentos funcionaisPrebióticosAmidoFarinhasBanana verdeMicrobiota intestinalBiologia molecular
Resumo
A farinha de banana verde (FBV) tem sido estudada como ingrediente funcional, principalmente como fonte de carboidratos não disponíveis, sendo o amido resistente o componente mais expressivo. Estudos de fermentação da FBV in vitro têm mostrado sua alta fermentabilidade e consequente capacidade de produção de ácidos graxos de cadeia curta. Estes compostos têm sido associados a várias propriedades benéficas para a saúde intestinal, bem como efeitos sistêmicos no metabolismo de glicose e lipídios. Os ensaios clínicos de média duração (duas semanas) realizados pelo presente grupo, em voluntários saudáveis mostraram efeito positivo sobre a saciedade, resposta glicêmica e melhoria do funcionamento intestinal, indicando que a FBV possui atributos positivos para auxiliar na redução do risco de doenças crônicas não transmissíveis (DCNT). Entretanto, pouco se sabe sobre a capacidade da FBV em estimular seletivamente o crescimento e/ou atividades de uma ou mais bactérias intestinais benéficas, associadas com a saúde e o bem-estar, ou seja uma possível ação prebiótica. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar o impacto da FBV, consumida por voluntários saudáveis durante seis semanas, na microbiota intestinal, através de técnicas de biologia molecular, e a interação com a melhoria no funcionamento intestinal e efeitos na fome/saciedade. (AU)

Produção de lipídeos especiais por interesterificação enzimática de óleos exóticos da Amazônia: avaliação do potencial dos novos produtos

Beneficiário:Gabriela Alves Macedo
Instituição: Faculdade de Engenharia de Alimentos (FEA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Gabriela Alves Macedo
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/22774-5
Vigência: 01 de abril de 2013 - 31 de março de 2015
Assunto(s):Síntese enzimáticaÓleos vegetaisLipídeosLipaseAlimentos funcionaisAmazônia
Resumo
A interesterificação enzimática é usada para re-estruturar triacilgliceróis, induzindo a troca dos ácido graxos na estrutura do glicerol. As mudanças na composição do triacilglicerol original, comparado a uma simples mistura de óleo e gordura, modifica as suas propriedades físico-químicas e nutricionais, aumentando assim as possíveis aplicações destes lipídios. No Brasil, especialmente na Amazônia, a ampla disponibilidade de óleos vegetais pouco explorados, com potencial propriedades nutricionais, favorece o desenvolvimento de misturas interesterificadas com alto valor biológico e novas características tecnológicas. O uso de lipases comerciais em reações de interesterificação tem crescido nos últimos anos, com resultados positivos para a síntese de produtos de alto valor agregado, como os substitutos de gordura de leite materno e de manteiga de cacau. Entretanto o número de enzimas capazes de catalisar estas reações ainda é limitado, o que justifica a busca por novas enzimas com diferentes especificidades, para a produção de misturas interesterificadas com características únicas e muitas vezes a um custo menor. Assim, o objetivo deste trabalho será produzir e caracterizar, misturas interesterificadas produzidas com óleos e gorduras da região amazônica utilizando três sistemas de enzimas: lipase não comercial (Rhizopus sp) produzida por fermentação em estado sólido; lipase comercial TL-IM (Novozymes); mistura das lipases comercial e não-comercial. Serão utilizados para a produção das misturas o óleo de patauá e a gordura de estearina de palma e o óleo de buriti e gordura de muru-muru. (AU)

Existe correlação entre a atividade antioxidante in vitro e celular de frutas e legumes recomendados para a dieta do brasileiro?

Beneficiário:Fernanda Akemi Medeiros Tamashiro
Instituição: Instituto de Saúde e Sociedade (ISS). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Baixada Santista. Santos, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Veridiana Vera de Rosso
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Processo:13/03454-2
Vigência: 01 de abril de 2013 - 31 de outubro de 2013
Assunto(s):CarotenoidesAntioxidantesCompostos fenólicos
Resumo
A tendência mundial em consumir alimentos funcionais e que possuam compostos bioativos tem crescido muito nos últimos anos, devido à reconhecida associação entre a ingestão de frutas e vegetais e a diminuição do risco de desenvolvimento de algumas doenças crônico-degenerativas. O valor da atividade antioxidante de alimentos de origem vegetal tem se mostrado um indicativo importante de seu valor funcional, no entanto os métodos químicos in vitro empregados para sua determinação não reproduzem as condições fisiológicas celulares, não consideram a biodisponibilidade e o metabolismo dos compostos bioativos, e na sua maioria empregam radicais que não existem em sistemas biológicos reais. Desta forma, o emprego de métodos como o que mede a Atividade Antioxidante Celular (AAC) torna-se extremamente vantajoso, pois supre de maneira eficiente as deficiências que os métodos químicos in vitro apresentam, sendo mais simples e barato do que modelos animais e humanos. O estabelecimento de uma correlação entre as atividades antioxidante in vitro e celular é importante sob o aspecto de corroboração dos dados gerados em diversos trabalhos científicos que só empregaram métodos químicos e também para determinar valores de atividade antioxidante que consideram o efeito da absorção e metabolismo celular. (AU)

Modulação do estresse de retículo endoplasmático de adipócitos e leucócitos de camundongos induzidos a obesidade e tratados cronicamente com extrato de chá verde (Camellia sinensis)

Beneficiário:Anaysa Paola Bolin
Instituição: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Rosemari Otton
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Processo:12/20415-8
Vigência: 01 de abril de 2013 - 31 de março de 2016
Assunto(s):Camellia sinensisPolifenóisObesidadeEstresse do retículo endoplasmático
Resumo
A obesidade é atualmente um dos mais graves problemas de saúde pública em todo o mundo. Uma das mais importantes descobertas realizadas recentemente na investigação da obesidade foi o papel da inflamação crônica que ocorre em pacientes obesos. É importante entendermos como o excesso de adiposidade pode perturbar funções metabólicas e como essas perturbações integram respostas imunes. Perturbações vistas na obesidade são capazes de ocasionar estresse no retículo endoplasmático (RE), sendo esta organela celular responsável pela dobragem e maturação de proteínas. Durante o período de estresse o RE é capaz de se adaptar e se o estresse persiste é capaz de levar a célula à morte. O chá feito a partir de folhas processadas de Camellia sinensis é consumido em diferentes partes do mundo como chá verde, preto ou oolong. As catequinas, os principais compostos polifenólicos no chá verde, exercem diversos efeitos na saúde humana através de múltiplos mecanismos, incluindo efeito antioxidante, anti-hipertensivo, anti-inflamatório, anti-proliferativo, anti-trombogênico, antimutagênico, antidiabético e redutor de lipídios. Este estudo tem como objetivo investigar o efeito da suplementação crônica com extrato de chá verde na sinalização inflamatória e de estresse de retículo endoplasmático no tecido adiposo e leucócitos de camundongos induzidos a obesidade por dieta de cafeteria. Além do desenho experimental in vivo pretendemos avaliar as ações regulatórias da catequina mais abundante encontrada no chá verde, a EGCG, no estresse de retículo endoplasmático em linfócitos e neutrófilos do sangue periférico humano de indivíduos saudáveis tratados com ácido palmítico. Para isso avaliaremos: (1) proteínas da via UPR através da expressão gênica (expressão de RNAm por RT-PCR) de GADD34, CHOP, GRP78/BIP, GRP9, XBP1, ATF4 e ATF6 e expressão proteica e nível de fosforilação das proteínas eif2a, Ire1 e PERK; (2) processo inflamatório pela avaliação da expressão gênica de TNF-alfa, IL6, IL1b, IFN-y e MCP1 e expressão proteica e nível de fosforilação das proteínas NFkB, MyD88, TLR4, JNK, p38 MAPK, ERK1/2 e Akt; (3) resistência à insulina pela expressão e fosforilação das proteínas JNK, IR, IRS1, Akt, PI3K e Glut4 e; (4) envolvimento da produção de ROS. Este estudo poderá contribuir para a compreensão do envolvimento do estresse de retículo na obesidade e da ação específica do chá verde sobre essas células. Além disso, futuramente este alimento funcional poderá ser indicado também como um adjuvante no tratamento das complicações da obesidade. (AU)

Atividade antioxidante de um composto fenólico lipofilizado e microencapsulado adicionado a uma emulsão contendo ácidos graxos ômega 3 e fitosteróis

Beneficiário:Inar Alves de Castro
Instituição: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Inar Alves de Castro
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/08058-5
Vigência: 01 de abril de 2013 - 31 de março de 2015
Assunto(s):Alimentos funcionaisAntioxidantesFitosteróisÁcidos graxos omega 3Substâncias bioativasLipofilização
Resumo
Ácidos graxos Omega 3 e fitosteróis podem ser combinados na formulação de emulsões alimentícias funcionais visando a redução dos triacilgliceróis e colesterol respectivamente, promovendo assim a redução de risco para doenças cardiovasculares. Entretanto, esses dois compostos bioativos são altamente susceptíveis à oxidação no processo de incorporação nos alimentos e durante o shelf-life, mesmo quando mantidos sob baixas temperaturas. Os produtos formados pela oxidação dos ácidos graxos Omega 3 e dos fitosteróis, além de anularem seus efeitos funcionais benéficos, podem ser tóxicos para animais e humanos. Uma estratégia para superar essa limitação consiste na adição de compostos com ação antioxidante, que irão oxidar em lugar dos compostos bioativos. Esses antioxidantes podem ser naturais ou artificiais, sendo os artificiais mais efetivos porém potencialmente mutagênicos, dependendo da dosagem consumida. Neste estudo, duas tecnologias serão avaliadas com objetivo de melhorar a eficiência antioxidante de um composto fenólico natural: lipofilização e microencapsulação. Uma emulsão óleo em água (1%) contendo ácidos graxos Omega 3 de origem vegetal (óleo de Echium) e fitosteróis será preparada sem antioxidantes, e contendo o composto fenólico em três formas: puro, microencapsulado e lipofilizado. A estabilidade oxidativa da emulsão será monitorada através de marcadores químicos para produtos primários e secundários da oxidação lipídica. O melhor tratamento será então aplicado no preparo de uma emulsão láctea contendo ácidos graxos Omega 3 e fitosteróis. Os mesmos marcadores químicos serão utilizados para avaliar a estabilidade oxidativa da emulsão láctea funcional, adicionados da análise sensorial das amostras. (AU)

Avaliação do potencial biológico de lipídeos especiais produzidos por interesterificação enzimática de óleos exóticos da Amazônia

Beneficiário:Juliana Alves Macedo
Instituição: Faculdade de Engenharia de Alimentos (FEA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Juliana Alves Macedo
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Nutrição - Bioquímica da Nutrição
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/22829-4
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):Alimentos funcionaisÓleos vegetaisAntioxidantesLipaseAmazônia
Resumo
No Brasil, especialmente na Amazônia, a ampla disponibilidade de óleos vegetais pouco explorados, com interessantes propriedades nutricionais, favorece o interesse no estudo do potencial biológico destes óleos e o desenvolvimento de misturas interesterificadas com alto valor biológico e melhores características tecnológicas. O uso de lipases comerciais imobilizadas, em reações de interesterificação, tem crescido nos últimos anos, apresentando resultados positivos na síntese de produtos de alto valor agregado, como os substitutos de gordura de leite materno e manteiga de cacau. A interesterificação enzimática é usada para re-estruturar triacilgliceróis, induzindo a troca dos ácido graxos na estrutura do glicerol. As mudanças na composição do triacilglicerol original, comparado a uma simples mistura de óleo/gordura, modifica as suas propriedades físico-químicas e nutricionais, aumentando assim as possíveis aplicações destes lipídios. Dessa forma, o objetivo deste trabalho será a avaliação do potencial biológico, através da determinação da capacidade antioxidante, dos óleos amazônicos selecionados e dos novos óleos gerados a partir das misturas interesterificadas por sistemas enzimáticos. Serão utilizados para a produção das misturas, óleos e gorduras da região amazônica pouco conhecidos fora da sua região de origem, mas com potencial para aplicações industriais, conforme a tradição da população local, e a incipiente indústria de cosméticos artesanais baseadas nestes óleos. As misturas serão compostas pelo óleo de Patauá combinado com a gordura de estearina de Palma; e o óleo de Buriti combinado com gordura de Muru-Muru. (AU)

Avaliação em ratos do perfil lipidômico e biodisponibilidade de flavonóides naturais e biotransformados

Beneficiário:Patrícia de Oliveira Carvalho
Instituição: Universidade São Francisco (USF). Campus Bragança Paulista. Bragança Paulista, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Patrícia de Oliveira Carvalho
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Nutrição
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/20393-4
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):Alimentos funcionaisFlavonoidesÁcidos graxosHidróliseBiotransformação
Resumo
Relatos anteriores do nosso grupo mostraram que a hidrólise da fração glicosídica da rutina aumenta as atividades antioxidante e antiproliferativa avaliadas por testes in vitro. A hidrólise enzimática com liberação total ou parcial da fração glicosídica é capaz de gerar compostos mais simples com melhor funcionalidade. No presente estudo pretende-se avaliar comparativamente em ratos o efeito de dois flavonóides (rutina e hesperidina) antes e após a modificação enzimática sobre o perfil lipídico plasmático e tecidual e sobre os parâmetros bioquímicos envolvidos nos processos oxidativos. Para os ensaios, os compostos (1mmol eq flavonoide/Kg de peso do animal) serão administrados oralmente a ratos Wistar machos durante 30 dias. Os lípides do plasma, eritrócitos e tecidos serão extraídos com clorofórmio e metanol, as classes de fosfolípides separadas por cromatografia em fase sólida (SPE) e a composição de ácidos graxos avaliada por cromatografia à gás (CG). No plasma será ainda analisada a concentração da aglicona por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (UPLC-MS). Além disto, medidas bioquímicas-moleculares serão realizadas para a quantificação de malondialdeído, enzimas antioxidantes e expressão das desaturases (FADS1 e FADS2) no plasma e tecidos dos animais. A presente proposta pretende contribuir para o entendimento dos efeitos dos flavonóides e de seus derivados hidrolisados assim como na elucidação destes efeitos em relação à estrutura do composto. (AU)

Propriedades antioxidantes e características físicas, sensoriais e nutricionais de cereal matinal extrusado à base de milho elaborado com farinha de trigo de grão inteiro, jabuticaba e amido resistente

Beneficiário:Caroline Joy Steel
Instituição: Faculdade de Engenharia de Alimentos (FEA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Caroline Joy Steel
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Tecnologia de Alimentos
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/23281-2
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2015
Assunto(s):CereaisAlimentos funcionaisCompostos fenólicosFibras na dietaAmido resistenteAntioxidantesAntocianinasExtrusão
Resumo
A extrusão é um dos processos mais comuns na obtenção de cereal matinal ready-to-eat (RTE), tendo o amido como o principal constituinte estrutural. Este processo trabalha os ingredientes sob condições de alta temperatura, umidade, pressão e cisalhamento. Atentos à demanda do crescente número de consumidores preocupados com a saúde, estudos têm mostrado que é possível introduzir na formulação de extrusados ingredientes que incrementem o seu valor nutricional e/ou funcional e, no caso de cereal matinal, farinha de trigo de grão inteiro, produtos derivados de frutas e amido resistente são exemplos com potencial de associar funcionalidade ao produto. Além das fibras, cereais e frutas contêm uma variedade de fitonutrientes, incluindo os antioxidantes, também associados à redução do risco de doenças crônicas. Já o amido resistente apresenta comportamento similar ao da fibra alimentar, e tem sido relacionado a efeitos benéficos locais (prioritariamente no intestino grosso) e sistêmicos, através de uma série de mecanismos. Porém, existem poucos estudos referentes ao efeito do processamento sobre estes compostos funcionais fisiológicos. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar o efeito da substituição da farinha de milho (FM) por farinha de trigo de grão inteiro (FTGI) e/ou farinha da casca de jabuticaba (FJ) e/ou amido resistente (AR), da temperatura e da umidade de extrusão sobre as propriedades tecnológicas, sensoriais e nutricionais de cereal matinal RTE. Os cereais matinais serão elaborados seguindo 3 planejamentos experimentais 23 para a incorporação de cada um dos ingredientes funcionais (FTGI, FJ e AR). Os produtos extrusados serão avaliados pelos aspectos físicos, químicos, nutricionais e sensoriais, além da determinação do shelf-life. (AU)

Análise da imunomodulação pelo probiótico Lactobacillus rhamnosus sobre macrófagos estimulados com lipopolissacarídeo na produção de TNF-±, IL-12, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 e óxido nítrico

Beneficiário:Bruna Costa de França Marques
Instituição: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Luciane Dias de Oliveira
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo:12/24904-3
Vigência: 01 de março de 2013 - 28 de fevereiro de 2014
Assunto(s):Óxido nítricoCitocinas
Resumo
Crescentes evidências justificam a utilização de micro-organimos probióticos em alimentos funcionais, produtos lácteos, ou outros suplementos alimentares destinados à manutenção e promoção da saúde humana, com uma renovação do interesse no uso de probióticos, os quais são capazes de modular a resposta imune de células sob estímulos antigênicos provenientes dos constituintes da parede celular de micro-organismos. Sabendo-se que lipopolissacarídeo (LPS) é um potente ativador celular e que os probióticos favorecem a atividade fagocítica inespecífica de macrófagos, bem como sua ativação e produção de citocinas pró e anti-inflamatórias, torna-se de grande importância avaliar seu papel imunomodulador em macrófagos ativados por LPS, uma vez que os efeitos imunomoduladores dos probióticos ainda não estão claramente definidos e a compreensão de seu mecanismo de ação na resposta imune possibilitará melhor indicação de seu uso terapêutico. Assim, a proposta deste estudo será avaliar o efeito imunomodulador do probiótico Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por LPS com relação à produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-±, IL-1 ², IL-4, IL-6, IL-10, IL-12) e óxido nítrico. Será utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Serão empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) Probiótico vivo (PV) na concentração de 5 x 107 células/mL padronizada em espectrofotômetro; 2) Probiótico morto (PM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão do probiótico (SP) resultante da centrifugação da suspensão PM a 5000 rpm/10min. Serão utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino). Para realização dos testes, estas células serão distribuídas em microplacas de poliestireno na concentração de 1 x 106 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas serão lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células serão estimuladas com LPS de Escherichia coli na concentração de 1 µg/mL, recebendo, ao mesmo tempo, as diferentes preparações dos probióticos. As placas serão incubadas por 8 h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas serão coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-±, IL-1², IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático (ELISA), e de óxido nítrico pelo método de Griess. Os resultados serão avaliados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%). (AU)

Efeito da inclusão de diferentes níveis de óleo de canola na dieta de vacas em lactação sobre a produção, composição do leite, digestibilidade aparente, parâmetros sanguíneos e ruminais

Beneficiário:Arlindo Saran Netto
Instituição: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga, SP, Brasil
Pesquisador responsável:Arlindo Saran Netto
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Zootecnia - Nutrição e Alimentação Animal
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo:12/22402-0
Vigência: 01 de fevereiro de 2013 - 31 de janeiro de 2015
Assunto(s):Dieta animalAlimentos funcionaisÓleos vegetaisÓleo de canolaÁcido linoleicoLipídeosQualidade do leiteBovinocultura leiteira
Resumo
Objetiva-se com o presente estudo avaliar o efeito da inclusão de diferentes níveis de óleo de canola na dieta de vacas em lactação sobre a produção e composição do leite, como também, parâmetros sanguíneos e ruminais. Serão utilizadas 24 vacas de raça Holandês, as quais distribuídas em quadrado latino 3x3 conforme os seguintes tratamentos: T1= dieta controle; T2= inclusão de 3% de óleo de canola na dieta e T3= inclusão de 6% de óleo de canola na dieta. Os animais serão alojados em baias individuais para avaliação do consumo voluntário com 10% de sobra no cocho. As dietas serão à base de silagem de milho, farelo de soja, milho moído, uréia e sal comum, as quais serão formuladas nas recomendações do NRC (2001) e balanceadas para serem isoproteicas e isoenergéticas. O consumo de matéria seca será avaliado durante todo o período experimental, sendo pesada a oferta e as sobras diariamente. As demais variáveis analisadas serão: composição do leite (gordura, proteína, lactose, sólidos totais, nitrogênio uréico e contagem de células somáticas); perfil lipídico do leite e dos alimentos; peso corporal; escorre de condição; sangue (ácidos graxos não-esterificados, glicose, uréia, triglicerídeos, nitrogênio ureico, betahidroxibutirato, albumina, proteína total, colesterol total, HDL, LDL, creatina quinase (CK), gama glutamil transferase (GGT), aspartato aminotrasferase (AST), superóxido dismutase (SOD)); digestibilidade aparente; líquido ruminal (pH, nitrogênio amoniacal e ácidos graxos voláteis). Os resultados serão analisados pelo programa computacional Statistical Analysis System® (SAS, 2001), pelo comando Proc-MIXED do SAS, adotando-se nível de significância de 5% de acordo com o seguinte modelo: Yijkl = µ + Ti + Qj + A(Q)k + Pl + eijkl. (AU)
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