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Efeito da redução da função colinérgica na mecânica pulmonar e na histopatologia pulmonar em modelo experimental de inflamação aguda induzida por instilação de LPS em camundongos geneticamente modificados

Processo: 13/02881-4
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2013
Vigência (Término): 31 de março de 2016
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
Pesquisador responsável:Carla Máximo Prado
Beneficiário:
Instituição-sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo, SP, Brasil
Assunto(s):Sistema respiratório   Lesão pulmonar aguda   Receptores nicotínicos   Receptores muscarínicos   Camundongos   Animais geneticamente modificados

Resumo

A Lesão Pulmonar Aguda (LPA) é caracterizada por inflamação pulmonar extensa, recrutamento de polimorfonucleares e liberação de mediadores pró-inflamatórios. É uma condição grave que evolui com óbito em aproximadamente 40% dos casos. A despeito de diversos estudos que elucidaram a fisiopatologia da LPA, o tratamento ainda é insatisfatório. Recentemente o sistema colinérgico antiinflamatório foi descrito no pulmão e está relacionado a um reflexo via nervo vago que inibe a liberação de citocinas inflamatórias por estimulação de receptores nicotínicos. Nas primeiras etapas deste projeto observamos que animais com deficiência colinérgica sistêmica não apresentam piora da inflamação pulmonar aguda induzida por LPS. Com o intuito de entender os mecanismos envolvidos nesta resposta, utilizaremos estímulos farmacológicos para isolar ação de receptores muscarínicos e nicotínicos nesta linhagem. Além disso, com o intuito de elucidar se a via colinérgica anti-inflamatória está envolvida na LPA, em animais normais, utilizaremos agonista de receptores nicotínicos. Objetivo: 1. Avaliar os componentes colinérgicos nos animais VAChT e averiguar se a indução de LPA interfere com estes componentes; 2. Avaliar mecanismos envolvidos na resposta ao LPS em animais com deficiência colinérgica induzida por redução de VAChT; 3. Avaliar o potencial efeito terapêutico do PNU, agonista de receptor nicotínico alfa-7, em modelo de LPS em C57Bl6. Metodologia: Serão utilizados camundongos macho geneticamente modificados apresentando uma redução da expressão da proteína VAChT, o que se associa à diminuição na liberação de acetilcolina. Estes animais serão divididos de acordo com sua genotipagem em homozigoto (HOM) e selvagem (WT) e receberão instilação intratraqueal de LPS ou salina 24 horas antes do protocolo experimental. Estes animais serão tratados com PNU, agonista do receptor nicotínico, ou com pilocarpina, agonista de receptores muscarínicos. Ainda em animais normais C57BL6 que receberão instilação de LPS ou salina, utilizaremos o PNU, realizando uma curva dose resposta em diferentes tempos após a instalação da LPA, 6 horas após a instilação de LPS. Serão avaliados: mecânica do sistema respiratório; inflamação pulmonar por intermédio do lavado broncoalveolar e de citometria de fluxo e da resposta macrofágica no tecido pulmonar; o remodelamento da matriz extracelular, avaliando o conteúdo de fibras colágenas e elásticas; a expressão de TNF-alfa e o estresse oxidativo por intermédio da quantificação do conteúdo do isoprostano PGF2. Todos os parâmetros histopatológicos serão quantificados por técnica morfométrica. Dependendo das respostas obtidas, outras citocinas serão também quantificadas. Além disso, avaliaremos por Elisa ou western blot, os componentes colinérgicos no pulmão a fim de averiguar como estão estes componentes nos animais VAChT e também para entender se a LPA interfere com este sistema (receptores muscarínicos e nicotínicos, VAChT e AChE). A análise estatística será realizada por meio do programa SigmaStat. (AU)

Matéria(s) publicada(s) na Agência FAPESP sobre a bolsa:
Receptor de nicotina pode ser alvo para tratamento de inflamação pulmonar 

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
PINHEIRO, NATHALIA M.; SANTANA, FERNANDA P. R.; ALMEIDA, RAFAEL RIBEIRO; GUERREIRO, MARINA; MARTINS, MILTON A.; CAPERUTO, LUCIANA C.; CAMARA, NIELS O. S.; WENSING, LISLAINE A.; PRADO, VANIA F.; TIBERIO, IOLANDA F. L. C.; PRADO, MARCO ANTONIO M.; PRADO, CARLA M. Acute lung injury is reduced by the alpha 7nAChR agonist PNU-282987 through changes in the macrophage profile. FASEB JOURNAL, v. 31, n. 1, p. 320-332, JAN 2017. Citações Web of Science: 0.
GAMES, ELLEN; GUERREIRO, MARINA; SANTANA, FERNANDA R.; PINHEIRO, NATHALIA M.; DE OLIVEIRA, EMERSON A.; LOPES, FERNANDA D. T. Q. S.; OLIVO, CLARICE R.; TIBERIO, IOLANDA F. L. C.; MARTINS, MILTON A.; LAGO, JOAO HENRIQUE G.; PRADO, CARLA M. Structurally Related Monoterpenes p-Cymene, Carvacrol and Thymol Isolated from Essential Oil from Leaves of Lippia sidoides Cham. (Verbenaceae) Protect Mice against Elastase-Induced Emphysema. Molecules, v. 21, n. 10 OCT 2016. Citações Web of Science: 1.

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