Regulação e papel do sistema de defesa antioxidante Ohr/OhrR na fisiologia e patogenicidade de Chromobacterium violaceum

• Processo: 10/51966-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Luis Eduardo Soares Netto
• Beneficiário: José Freire da Silva Neto
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 07/58147-6 - Aspectos biológicos de tióis: estrutura protéica, defesa antioxidante, sinalização e estados redox, AP.TEM
• Assunto(s): Estresse oxidativo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Chromobacterium Violaceum | Defesa Antioxidante | Estresse Oxidativo | Hidroperoxidos Organicos | Patogenicidade | Proteinas Ohr/Osmc

Resumo

As bactérias possuem sofisticados mecanismos de defesa contra espécies reativas de oxigênio, às quais são geradas continuamente como subprodutos do metabolismo aeróbico ou produzidas por hospedeiros como resposta à infecção por patógenos. Um importante sistema de defesa contra hidroperóxidos orgânicos é o aumento na expressão da peroxidase dependente de tiól Ohr (Organic Hydroperoxide Resistance Proteirí), uma enzima da família Ohr/OsmC capaz de remover hidroperóxidos orgânicos com alta eficiência e especificidade. Neste sistema, presente exclusivamente em bactérias, o repressor transcricional OhrR funciona como um sensor que libera a transcrição do gene ohr na presença do hidroperóxido. A caracterização bioquímica e estrutural de Ohr de Xylella fastidiosa vem sendo realizada com sucesso em trabalhos anteriores do nosso grupo. Neste projeto serão investigados aspectos genéticos do sistema de defesa antioxidante Ohr/OhrR com a finalidade de definir seu papel fisiológico, sua regulação e seu possível envolvimento com patogenicidade. Visto que a linhagem patogênica de Xylella fastidiosa é bastante retrataria à manipulação genética, foi escolhida como modelo a beta-proteobactéria Chromobacterium violaceum. Trata-se de um patógeno oportunista com genoma seqüenciado para o qual foram desenvolvidas recentemente ferramentas genéticas e modelos experimentais de patogenicidade em camundongos e Caenorhabditis elegans. A função dos genes será definida através da obtenção de linhagens mutantes que serão utilizadas em ensaios de sobrevivência na presença de diferentes agentes oxidantes e em testes de patogenicidade. Ensaios de expressão como Northern blot ou ensaio de atividade de beta-galactosidase usando o gene lacZ como repórter permitirão determinar quais sinais desencadeiam o aumento na expressão de ohr e como sua regulação será mediada pelo regulador OhrR. (AU)